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目的:
(1)观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对胃癌细胞MMP-2和MMP-9分泌的影响。
(2)探讨MAPK信号通路在TGF-β1诱导胃癌细胞MMP-2和MMP-9分泌过程中可能的作用。
方法:
以SGC7901、MKN45和BGC823胃癌细胞系为研究对象。
(1)10ng/ml TGF-β1分别作用于三种细胞48h后,明胶酶谱法检测各细胞上清液中MIVIP-2和MMP-9的变化。
(2)10ng/ml TGF-β1分别刺激三种细胞不同时间点后,Western blotting检测丝裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)家族的三个主要成员:p38激酶、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化水平的变化。
(3)用相应特异性抑制剂SB203580、SP600125、PD98059分别阻断p38、JNK、ERK通路后加入10ng/ml TGF-β1刺激细胞,明胶酶谱法分析阻断MAPK通路后,TGF-β1对三种细胞MMP-2和MMP-9分泌的影响。
结果:
(1)TGF-β1可诱导SGC7901、MKN45和BGC823细胞分泌MMP-2和MMP-9。
(2)TGF-β1可诱导BGC823细胞p38的活化,但对SGC7901、MKN45细胞无此作用;TGF-β1对SGC7901、MKN45和BGC823细胞的JNK均有活化效应;TGF-β1可显著激活MKN45和BGC823细胞的ERK信号通路,但对SGC7901细胞无明显激活作用。
(3)i)P38特异性抑制剂SB203580可抑制TGF-β1对BGC823细胞p38的活化,但不能抑制TGF-β1诱导其MMP-2和MMP-9分泌。
ii)JNK特异性抑制剂SP600125可抑制TGF-β1诱导SGC7901、MKN45和BGC823细胞JNK的活化,但不能抑制TGF-β1诱导这三种细胞MMP-2和MMP-9的分泌。
iii)ERK活化的特异性抑制剂PD98059可显著抑制TGF-β1激活MKN45和BGC823细胞的ERK信号通路,且可明显抑制TGF-β1诱导这两种细胞MMP-2和MMP-9的分泌。
结论:
(1)TGF-β1可诱导胃癌细胞MMP-2和MMP-9的分泌。
(2)TGF-β1可快速激活胃癌细胞中的MAPK,激活的亚型因细胞系的不同而不同。
(3)TGF-β1诱导胃癌细胞MMP-2和MMP-9的分泌可由ERK通路介导。
(4)TGF-β1诱导胃癌细胞MMP-2和MMP-9的分泌可能还存在其它信号通路的参与。