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一、研究目的使用具有高光反应活性的二氧化钛（Titanium dioxide, TiO2），建立光动力平台，并在此基础上，联合中药单体蟾毒灵（Bufalin, Bu），以人黑色素瘤A375细胞为实验对象，探索二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞的抗肿瘤作用及机制研究，希望能为临床治疗黑色素提供一种新的治疗方法。二、研究方法（一）二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞的抗肿瘤作用效应观察采用二氧化钛（TiO212.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL）、紫外光（UVA800μW/cm2，75min）、二氧化钛光动力（TiO212.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL，UVA，800μW/cm2，75min）、蟾毒灵（Bu5nM、10nM、20nM、40nM、80nM），作用于A375细胞，培养12h、24h、48h及72h后，采用MTT方法，计算细胞增殖抑制率，探究二氧化钛光动力、蟾毒灵对A375细胞增殖的影响。采用二氧化钛光动力（TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min）、蟾毒灵（Bu10nM）、二氧化钛光动力联合蟾毒灵（TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min，Bu10nM）作用于A375细胞，培养12h、24h、48h及72h后，采用MTT方法，计算细胞增殖抑制率。同时使用光学显微镜，观察细胞形态变化。（二）二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞的抗肿瘤作用机制研究采用二氧化钛光动力联合蟾毒灵（TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min）、二氧化钛光动力（TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min）、蟾毒灵（Bu10nM）作用于A375细胞，借助于流式细胞仪，采用PI染色、Annexin V-FITC/PI双染、DCFH-DA染色等方法探究细胞周期、细胞凋亡及细胞内活性氧含量的变化情况，并采用Western Blot探究二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。三、研究结果（一）二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞抗肿瘤作用效应观察单用二氧化钛光动力和蟾毒灵均能抑制A375细胞增殖，但当二者联合后，其对A375细胞的增殖抑制作用更强，明显优于单用二氧化钛光动力、蟾毒灵，二者之间存在明显的统计学差异（P<0.05）。当二氧化钛光动力联合蟾毒灵作用于A375细胞后，A375细胞数量减少，且细胞皱缩、变圆、变小。（二）二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞抗肿瘤作用的机制研究二氧化钛光动力、蟾毒灵均可明显增加A375细胞内活性氧含量（P<0.05），增强细胞内Bax/Bcl-2蛋白的比例，诱导细胞凋亡或阻滞细胞周期，从而发挥对A375细胞的抗肿瘤作用。但二者的不同之处在于：二氧化钛光动力可明显诱导细胞凋亡，而蟾毒灵则主要将细胞阻滞于S期。当二氧化钛光动力联合蟾毒灵作用于A375细胞后，细胞内的活性氧含量明显增加，明显高于单用二氧化钛光动力或蟾毒灵的细胞（P<0.05）；且二氧化钛光动力联合蟾毒灵可通过诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期发挥抗肿瘤作用。四、研究结论二氧化钛光动力联合蟾毒灵对A375细胞的抗肿瘤效果明显优于单用二氧化钛光动力或蟾毒灵。二氧化钛光动力联合蟾毒灵可增加细胞内活性氧含量，诱导细胞凋亡，改变细胞周期，抑制A375细胞的增殖，提示二氧化钛光动力联合蟾毒灵有望成为一种新的治疗黑色素瘤有效方法。