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目的:本研究运用阳离子化牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)尾静脉注射的方法成功建立膜性肾病(membranous nephropathy,MN)大鼠模型,分组后分别给予不同剂量的加味升降散及盐酸贝那普利片进行干预,通过测定大鼠血肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白定量、血白蛋白等生化指标,通过光镜、电镜、免疫荧光观测大鼠肾脏病理变化,免疫组化检测CXC趋化因子配体16(CXC chemokine ligand16,CXCL16)、新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor,FcRn)蛋白及real-time PCR法检测CXCL16、FcRn在肾脏中的表达,来探讨加味升降散对膜性肾病大鼠的肾保护作用及对肾组织CXCL16、FcRn表达的影响,从而为临床用药提供理论依据。方法:选取清洁级健康SD大鼠60只,普通饲料喂养一周,待大鼠习惯其周围环境后,测定其24小时尿蛋白定量均小于5mg,随机分为10只、50只,依次为正常组(NG)及造模组。造模组预免疫1周后,予阳离子化牛血清白蛋白尾静脉注射,每周三次,共四周。测定24小时尿蛋白定量,确定模型复制成功后,随机分为模型组(MG)、西药组(BG)、升降散低剂量组(SLG)、升降散中剂量组(SMG)、升降散高剂量组(SHG),每组各10只。西药组给予盐酸贝那普利(10mg/kg/d)研磨溶于3ml生理盐水灌胃,升降散低、中、高剂量组分别给予加味升降散(4.53g/kg/d、9.06g/kg/d、18.12g/kg/d)溶于3ml生理盐水灌胃,模型组和正常组给予同等剂量的生理盐水灌胃。灌胃4周后,测定各组大鼠24小时尿蛋白定量(24-hour urinary total protein,24h-UTP),剪开腹壁,于股动脉取血,测定血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、血总蛋白(serum total protein,TP)、血白蛋白(albumin,ALB)、血总胆固醇(total cholesterol,TC)、血甘油三酯(triglyceride,TG)等生化指标,留取新鲜肾脏标本,通过光镜、电镜、免疫荧光观测大鼠肾脏病理变化,免疫组化检测CXCL16、FcRn蛋白及real-time PCR法检测CXCL16 mRNA、FcRn mRNA在肾脏中的表达。结果:1一般情况正常组大鼠精神良好、反应敏捷、毛发有光泽。模型复制成功后,各造模组大鼠出现精神萎靡、反应迟钝、毛发欠光泽、摄食减少等,甚至出现腹部水肿。给药后,各治疗组大鼠情况较前有所好转,模型组未见明显改善。2各组大鼠24小时尿蛋白定量比较模型复制成功后,各造模组24h-UTP均明显升高,较正常组相比差异有统计学意义(P<0.05)。灌胃4周后,各治疗组24h-UTP较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与升降散低剂量组相比较,西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组24h-UTP明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);西药对照组与升降散中剂量组、升降散高剂量组之间进行两两比较,未见明显差异(P>0.05)。3各组大鼠血总蛋白、血白蛋白、血总胆固醇、血甘油三酯比较模型复制成功后,与正常组相比,各造模组TP和ALB均明显降低、TC和TG均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。灌胃4周后,与模型组相比,各治疗组TP和ALB均显著升高,TC和TG显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与升降散低剂量组相比较,西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组TP和ALB明显升高、TC和TG明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);西药对照组与升降散中剂量组、升降散高剂量组之间进行两两比较,TP、ALB、TC、TG均未见明显差异(P>0.05)。4各组大鼠血肌酐、血尿素氮比较各组大鼠之间BUN、Scr相比无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。5各组大鼠肾脏病理变化正常组大鼠肾小球结构未见明显异常;模型组大鼠光镜下肾小球毛细血管襻基膜不规则增厚;电镜下肾小球基底膜不规则增厚,上皮下可见较多的电子致密物沉积,大量足突融合,钉突形成;免疫荧光可见lg G和C3沿着毛细血管袢及系膜区呈颗粒状弥漫性沉积。各治疗组与模型组比较,基底膜增厚程度较轻,上皮下电子致密物沉积较少,其中升降散低剂量组基底膜增厚程度较模型组轻,较其他治疗组重,其他治疗组相比未见明显差异。6免疫组化检测CXCL16、FcRn蛋白在肾脏的表达CXCL16在正常组及各造模组中均有不同程度的表达。与正常组相比,各造模组CXCL16的表达水平均增强(P<0.05);与模型组相比,各治疗组CXCL16的表达水平均有减弱(P<0.05);与升降散低剂量组相比,西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组CXCL16的表达水平均减弱(P<0.05);西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组两两比较,CXCL16的表达水平未见明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。FcRn在正常组及各造模组中均有不同程度的表达。与正常组相比,各造模组FcRn的表达水平均增强(P<0.05);与模型组相比,各治疗组FcRn的表达水平均有减弱(P<0.05);与升降散低剂量组相比,西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组FcRn的表达水平均减弱(P<0.05);西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组两两比较,FcRn的表达水平未见明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。7 Real-time PCR法检测CXCL16 mRNA、FcRn mRNA在肾脏的表达各造模组与正常组相比,CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表达水平均有上调,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组相比,CXCL16mRNA、FcRn mRNA的表达水平均有下调,差异有统计学意义(P<0.05);与升降散低剂量组相比,西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表达水平均有下调,差异有统计学意义(P<0.05);西药对照组、升降散中剂量组、升降散高剂量组两两比较,CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表达水平未见明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1加味升降散可明显升高膜性肾病大鼠的TP、ALB水平,显著降低膜性肾病大鼠的24h-UTP、TC、TG水平。2加味升降散可能具有抑制膜性肾病大鼠肾小球基底膜增厚及减少免疫复合物沉积的作用,可减轻肾脏病理损伤。3加味升降散可下调膜性肾病大鼠肾组织CXCL16蛋白及其mRNA、FcRn蛋白及其mRNA的表达水平,这可能与其减轻足细胞损伤,延缓膜性肾病的进展有关。