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目的:体外观察白细胞介素17(interleukin17,IL-17)对小鼠髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells)凋亡的影响,并探讨ERK1/2分子在其中的作用;于Lewis荷瘤小鼠体内研究IL-17是否通过调控MDSCs凋亡而影响肿瘤的生长。方法:(1)通过皮下注射Lewis细胞构建荷瘤小鼠模型,采用免疫磁珠分选技术(MACS)分离脾脏MDSCs细胞,常规培养。经IL-17处理后,使用AnnexinV/PI凋亡试剂盒检测MDSCs凋亡情况,通过Western-blot技术检测BCL-2的表达以及ERK1/2的磷酸化水平。(2)在MDSCs培养体系中加入不同浓度ERK1/2分子磷酸化抑制剂(U0126)预处理,再经IL-17作用,运用AnnexinV/PI凋亡试剂盒检测MDSCs的凋亡情况并通过Western-blot技术检测BCL-2的表达水平。(3)在荷瘤小鼠体内腹腔注射IL-17,2.5μg/只/次,共三次。观察肿瘤生长情况,测量肿瘤重量和大小;通过实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测核蛋白(Ki67)mRNA、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达情况。采用流式细胞术(FCM)检测树突状细胞、巨噬细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞的比例,免疫荧光技术(IF)检测肿瘤组织中MDSCs的浸润情况。(4)IL-17处理荷瘤小鼠后,通过MACS分选出MDSCs细胞。运用Western-blot技术检测细胞中ERK1/2磷酸化水平。常规培养后,使用AnnexinV/PI凋亡试剂盒检测MDSCs的凋亡情况,采用精氨酸酶(ARG-1)试剂盒检测ARG-1活性,运用Western-blot技术检测BCL-2表达水平。(5)IL-17处理荷瘤小鼠后,使用吉西他滨清除荷瘤小鼠体内MDSCs,过继转移经U0126处理后的MDSCs(简称过继转移模型)。测量肿瘤体积、重量,采用qRT-PCR检测肿瘤组织中iNOS mRNA表达水平,通过MACS分选MDSCs,常规培养,使用AnnexinV/PI凋亡试剂盒检测MDSCs凋亡情况,使用ARG-1试剂盒检测ARG-1活性,运用Western-blot技术检测BCL-2表达水平。结果:(1)IL-17处理MDSCs细胞24h,对照组活细胞比例为(45.33±1.556)%,il-17处理组为(59.55±2.831)%(p<0.001),晚期凋亡细胞比例对照组为(22.87±1.349)%,il-17处理组为(13.70±1.003)%(p<0.01)。western-blot结果显示:il-17处理组erk1/2分子磷酸化水平(p<0.001)、bcl-2表达水平都明显上调(p<0.01)。(2)在mdscs培养体系中加入erk1/2分子磷酸化抑制剂(u0126)预处理,再加入il-17处理。24h后,当u0126浓度为7.5μm时,空白对照组活细胞比例为(39.08±2.718)%,u0126处理组为(15.57±1.009)%(p<0.001),空白对照组晚期凋亡细胞比例为(8.007±1.777)%,u0126处理组为(26.95±1.179)%(p<0.01)。western-blot检测发现,u0126处理组抗凋亡蛋白bcl-2表达明显减少。(3)与pbs对照组相比,il-17处理荷瘤小鼠后,肿瘤生长速度加快(p<0.01),肿瘤体积增加[pbs组为2.753±0.7803cm3,il-17处理组为6.000±0.8653cm3)(p<0.05)],肿瘤重量增加[pbs组为1.886±0.2020g,il-17处理组为3.480±0.4586g(p<0.05)],核蛋白ki67mrna表达增加(p<0.05)。fcm结果显示:对照组脾脏中mdscs数量为(2.187±0.2541)×107、比例为(13.40±0.3606)%,il-17处理组数量为(3.967±0.1133)×107,比例为(24.43±1.1240)%(p<0.001)。if结果显示肿瘤组织中mdscs浸润数目增加,qrt-pcr检测发现肿瘤组织中inosmrna表达增加(p<0.05)。(4)与pbs对照组相比,western-blot检测发现经il-17处理后的荷瘤小鼠脾脏mdscs中erk1/2磷酸化水平、bcl-2表达水平明显上调(p<0.05);arg-1活性明显增强(p<0.05)。体外培养24h后,pbs对照组活细胞比例为(44.23±3.477)%,il-17处理组为(59.33±2.718)%(p<0.05);pbs对照组晚期凋亡细胞比例为(33.28±4.104)%,il-17处理组为(19.26±2.494)%(p<0.05)。(5)与对照组相比,过继转移经u0126处理的mdscs后,脾脏和肿瘤组织中mdscs分别减少了3.6%(p<0.05)、5.3%(p<0.01),肿瘤体积减小,肿瘤重量减轻(对照组为2.948±0.7537g,u0126处理组为0.7830±0.1597g)(p<0.05),肿瘤组织中ki67mrna(p<0.01)、inosmrna的相对表达水平降低(p<0.05),脾脏分离出的mdscs经培养后,凋亡水平明显增加,bcl-2表达量明显减少(p<0.001)。结论:(1)IL-17在体外能够通过增强ERK1/2分子的磷酸化抑制MDSCs的凋亡(2)IL-17能通过抑制MDSCs的凋亡和增强其免疫抑制活性促进肿瘤的生长。IL-17在荷瘤小鼠体内可明显促进肿瘤生长,这种作用与IL-17抑制MDSCs的凋亡有关。