食管鳞癌核基质蛋白LaminB1、NuMA的表达及核基质与端粒关系的研究

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目的异型性是肿瘤的形态特点,特别是恶性肿瘤细胞核。肿瘤细胞核的异型性是指肿瘤细胞核的形态与其来源的正常细胞核的形态存在差异。核形态主要由核被膜,核内容物(染色质、核基质、RNA、蛋白质等)的组成及分布所决定。核基质(nuclear matrix NM)是真核细胞核中存在的网状结构,它在细胞核的形态结构形成中起重要作用。本研究通过①观察癌与正常组织共有的核基质蛋白laminB1和NuMA在食管癌及正常食管粘膜上皮中的表达:②了解正常食管粘膜和食管癌核基质与端粒DNA结合的情况;初步探讨核基质蛋白在肿瘤细胞核异型性改变中的作用和意义。材料与方法 (1)材料:①收集经病理确诊的手术切除新鲜食管鳞癌标本30例,每例取癌组织及远端切缘粘膜组织各一式二份,一份做连续冰冻切片,供原位核基质制备、免疫组化检测用;另一份组织冻存于-70。C,供Western blot、Southern blot、RT-PCR、端粒酶活性检测;②培养食管癌细胞EC109,供免疫荧光-激光共聚焦显微镜观测。(2)应用改良的硫酸铵法制备冰冻切片组织原位核基质。(3)应用免疫组化方法检测正常食管粘膜上皮及食管鳞癌组织原位核基质制备前后核基质蛋白laminB1、NuMA的表达。(4)应用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观测食管癌EC109细胞原位核基质制备前后核基质蛋白laminB1、NuMA的表达。(5)应用硫酸铵法制备正常食管粘膜及食管鳞癌组织核基质蛋白,Western blot检测核基质蛋白中laminBl、NuMA的表达。(6)制备核基质-DNA结合物、提取结合于核基质的DNA,用端粒重复序列探
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