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目的:观察蛇床子催眠活性组分（HCC）、异虎耳草素（IS）对体外培养的原代海马神经元（PHN）细胞凋亡、释放神经递质含量的影响,以及对神经递质相关受体基因、生物钟基因表达的影响,探讨HCC、IS催眠作用机制。方法:1.PHN细胞培养与鉴定:体外培养SD乳鼠PHN细胞,倒置显微镜观察细胞生长状态,CCK-8法检测细胞活性,作出细胞生长曲线,在细胞生长状态最佳时,神经元特异性烯醇化酶（NSE）免疫组化法鉴定纯度。2.HCC、IS最佳给药浓度筛选:按1:10、1:2剂量距设置,采用CCK-8法二级检测24 h、48 h PHN细胞存活率。3.细胞分组与给药:在上述筛选浓度中取存活率显著高于空白对照组的浓度用于实验,将PHN细胞随机分为为空白对照、地西泮阳性对照(25μg·mL-1)、HCC低(25μg·mL-1)、中(50μg·mL-1)、高(100μg·mL-1)、IS低(5μg·mL-1)、中(10μg·mL-1)、高(20μg·mL-1)剂量共8组,给药后置37℃、5%CO2培养箱中24 h、48 h。4.指标检测:分别于给药24 h、48 h后采用流式细胞术（FCM）分析PHN细胞早期凋亡率;酶联免疫吸附法（ELISA）检测PHN细胞上清液γ-氨基丁酸（GABA）、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NA）等神经递质含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测给药24 h后PHN细胞GABA、5-HT相关受体基因及生物钟基因Clock、Bmal1、Cry1、Per1、Per2 mRNA表达量。结果:1.PHN细胞培养与鉴定:体外原代培养第78天海马神经元细胞生长状态良好、活性较高,鉴定纯度>90%。2.HCC、IS对海马神经元细胞作用24 h、48 h细胞存活率最佳给药浓度:24h、48h后细胞存活率25μg·mL-1、50μg·mL-1、100μg·mL-11 HCC显著高于空白对照组,200μg·mL-11 HCC组显著低于空白对照组;24 h 10μg·mL-1、20μg·mL-11 IS显著高于空白对照组,40μg·mL-11 IS显著低于空白对照组,48h 5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-11 IS显著高于空白对照组,40μg·mL-11 IS显著低于空白对照组。因此HCC在25μg·mL-1100μg·mL-1、IS在5μg·mL-120μg·mL-1细胞存活率最佳,确定HCC低、中、高浓度为25μg·mL-1、50μg·mL-1、100μg·mL-1、IS低、中、高浓度为5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1作为本实验浓度梯度。3.HCC、IS对PHN细胞早期凋亡率的影响:HCC、IS作用PHN细胞24h后,地西泮阳性对照、HCC中、低、IS高、中剂量组显著低于空白对照组;HCC、IS作用PHN细胞48 h后,地西泮阳性对照、HCC中、IS高剂量组细胞的凋亡率显著低于空白对照组,HCC高剂量组细胞凋亡率显著高于空白对照组。4.HCC、IS对PHN细胞释放神经递质的影响:HCC、IS作用PHN细胞24 h后,GABA含量地西泮阳性对照、HCC高、中、IS高剂量组显著高于空白对照组,5-HT含量HCC高、中剂量组显著高于空白对照组,NA含量各组变化不明显;HCC、IS作用PHN细胞48 h后,GABA含量地西泮阳性对照、HCC高、中、IS高、中剂量组显著高于空白对照组;5-HT含量HCC各剂量组均显著高于空白对照组;NA含量地西泮阳性对照、HCC各剂量组、IS高剂量组均显著高于空白对照组。5.HCC、IS对PHN细胞GABA、5-HT相关受体基因表达的影响:HCC、IS作用PHN细胞24 h后,Gabra1、Gabbr1、5-HT1A（A）、5-HT1A（B）、5-HT1B、5-HT1DD mRNA表达量地西泮阳性对照、HCC高、中剂量组均显著高于空白对照组,5-HT1A（C）mRNA表达量地西泮阳性对照、HCC各剂量组均显著高于空白对照组,Gabra5 mRNA表达地西泮阳性对照、HCC高、IS高剂量组均显著高于空白对照组,Gabrb2 mRNA表达HCC高剂量组显著低于空白对照组、HCC低剂量组显著高于空白对照组;Gabra1、5-HT1A（A）、5-HT1A（B）、5-HT1B、5-HT1DD mRNA表达量IS高、中剂量组均高于空白对照组,Gabbr1、5-HT1A（C）mRNA表达量地西泮阳性对照组、IS各剂量组均显著高于空白对照组。6.HCC、IS对PHN细胞生物钟基因表达的影响:Bmal1 mRNA表达量地西泮阳性对照、HCC高剂量组显著低于空白对照组,Clock mRNA表达量IS高剂量组显著低于空白对照组,Cry1、Per1、Per2 mRNA表达量地西泮阳性对照、HCC中、高剂量组、IS中、高剂量组均显著高于空白对照组。结论:HCC、IS降低体外培养的PHN细胞早期凋亡率,促进GABA、5-HT、NA释放,上调GABA、5-HT相关受体基因Gabra1、Gabra5、Gabbr1、Gabrb2、5-HT1A（A）、5-HT1A（B）、5-HT1A（C）、5-HT1B、5-HT1DD mRNA表达、上调钟基因负向反馈调节基因Cry1、Per1、Per2 mRNA表达,下调钟基因正向反馈调节基因Bmal1、Clock mRNA表达,增强抑制性神经递质释放及其受体基因表达,继而调节钟基因起到催眠作用。