“加味二术散”的制备及其对仔猪肠道绒毛及肠道微生物菌群的影响研究

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本研究根据中兽医脏腑辨证和病因学说,针对断奶仔猪脾胃娇嫩容易受到寒、湿的侵袭和断奶肝郁而导致脾虚下泻的发病机理,建立了“抑木扶土,理气活血”的用药原则,研制了一种中药散剂“加味二术散”,制定其质量标准,对其稳定性进行考察,并添加到断奶仔猪日粮中,主要从断奶仔猪肠道形态结构,肠道菌群的变化等来探索中药散剂“加味二术散”对断奶仔猪的影响。具体试验方法及结果如下:1“加味二术散”的研制与质量标准的制定:按处方比例混合中药材,粉碎,100目过筛,密封保存。分别从外观均匀度、水分、装量差异检查制剂,采用薄层色谱鉴别法对白术、苍术、柴胡、丹参、陈皮5味中药进行定性鉴别,利用高效液相色谱法测定白术内酯Ⅰ含量。建立了“加味二术散”的质量标准。2“加味二术散”初步稳定性的考察:对3批次“加味二术散”分别从性状、鉴别、水分、外观均匀度、装量差异、含量测定等方面进行加速稳定性及长期稳定性研究。结果表明,“加味二术散”在加速稳定性试验和长期试验中各检测指标均无变化,本品在接近药品的实际贮存条件的常温条件下保存12个月内质量稳定。3添加“加味二术散”对仔猪肠道形态和肠道菌群的影响:选用30日龄断奶仔猪45头,随机分为3个处理组,即:不做任何处理的空白对照组,在基础日粮中添加0.3%“加味二术散”的中药处理组以及在基础日粮中添加0.5%硫酸粘杆菌素的阳性对照组,每个处理3个重复。在试验开始后第7d、14d、21d分别截取十二指肠、回肠、空肠肠管中部样品于4%多聚甲醛固定保存,用于组织学观察;无菌采集空白对照组、中药处理组及阳性对照组仔猪回肠、盲肠、结肠内容物,用于肠道菌群变化的分析。结果显示,中药处理组在3个时间段十二指肠、空肠绒毛高度高于(P<0.05)阳性对照组,第14d,十二指肠和空肠绒毛高度/隐窝深度比高于(P<0.05)阳性对照组和空白对照组,第21d,回肠绒毛高度/隐窝深度比高于(P<0.05)阳性对照组。在试验期内,中药处理组在3个时间段回肠、盲肠内容物乳酸杆菌数(P<0.05)均高于阳性对照组,盲肠内容物双歧杆菌数高于(P<0.05)阳性对照组;第7d,中药处理组回肠、盲肠、结肠内容物大肠杆菌数均低于(P<0.05)空白对照组,添加第7d和第14d,结肠内容物双歧杆菌数高于(P<0.05)阳性对照组。对肠道DGGE图谱分析显示,中药处理组和阳性对照组肠道菌群的多样性高于空白对照组;盲肠菌群多样性高于回肠。中药处理组和阳性对照组回肠微生物菌群相似性高,均达到82%以上;中药处理组盲肠微生物菌群相似性高于空白对照组和阳性对照组。结果表明:“加味二术散”能够保证断奶仔猪肠道形态结构的完整性,改善肠道微生物菌群结构,防治仔猪腹泻,是一种安全有效的饲料添加剂。
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