酶催化水解动力学分离芳香酸对映体的研究

来源 :湘潭大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiangqiuli8609
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本文以商品化脂肪酶为催化剂;2,3-二苯基丙酸(2,3-2-PPA)、卡洛芬(CP)、2-(4-甲基苯基)丙酸(2-(4-MP)PPA)三种外消旋芳香酸的甲酯为底物构建了动力学拆分体系,并通过加入β-环糊精衍生物强化拆分性能;研究了温度、pH、酶浓度、环糊精的浓度、底物用量、反应时间等条件对产物光学纯度及底物转化率的影响;并采用了响应曲面法(RSM)等方法对拆分体系进行优化。1、研究了不同脂肪酶对映选择性催化水解(+,-)-2,3-二苯丙酸甲酯((+,-)-2,3-2-PPAME)的性能,筛选出南极假丝酵母脂肪酶A(CALA)为最佳催化剂。在反应体系中加入羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD),提高了 2,3-2-PPAME的溶解度,使底物转化率提高了 35.56%,同时保持较高的产物光学纯度。研究了一系列重要参数对底物转化率和产品光学纯度的影响亦对反应条件进行了优化,得到了该反应的最佳反应条件:温度为60℃、pH值为5.50、CALA浓度为30 mg/mL、HP-β-CD浓度为25 mmol/L、底物用量为0.12 mmol和反应时间为40 h。在此条件下,底物转化率可达44.07%,产物的光学纯度可达98.20%。2、对于脂肪酶对映选择性催化水解(R,S)-CPME反应体系,筛选CALA为最佳的催化剂。在水溶液体系中加入羟乙基-β-环糊精(HE-β-CD)后底物转化率由11.12%提高到了 30.84%,同时对产物光学纯度也有提高。采用响应曲面法(RSM)优化过程参数并获得最佳工艺条件:温度为76 ℃、pH值为6.0、CALA的酶浓度为40 mg/mL、HE-β-CD的浓度为40 mmol/L、底物的量为0.05 mmol和反应时间为30 h。在最佳反应条件下进行实验,实验结果表明产物的光学纯度和底物的总转化率分别可以达到96.24%和46.07%。3、构建了脂肪酶对映选择性催化水解2-(4-甲基苯基)丙酸甲酯((+,-)2-(4-MP)PPAME)反应体系并筛选出褶皱假丝酵母脂肪酶(CRL)为最佳的催化剂。在反应中加入HP-β-CD后底物转化率提高了 45.28%,同时保持较高的对映体过量。运用响应曲面法(RSM)优化反应条件并获得最佳工艺条件,包括反应温度为39℃、pH为6.60、CRL的浓度为12.5 mg/mL、HP-β-CD的浓度为35 mmol/L、底物的量为0.06 mmol和反应时间为40 h。在最佳反应条件下所得实验结果表明,产物的光学纯度和底物的总转化率分别可以达到95.22%和41.32%。
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