岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌生长和抗菌能力影响的研究(附 临床病例汇报)

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目的:比较两种灭菌方式对岩藻多糖理化性质产生的影响及对鼠李糖乳杆菌生长的影响。选择较优灭菌方式下的岩藻多糖,进一步研究其对鼠李糖乳杆菌的生长、代谢、形态、生物膜形成和抗菌能力的影响。方法:将岩藻多糖溶液分别用0.22μm过滤器和在高温高压条件下进行灭菌处理,冻干后分别通过傅里叶变换红外光谱仪对两种灭菌岩藻多糖化学键进行检测,并使用高效液相色谱法测定并分析两组灭菌后的岩藻多糖的分子量和化学组分。使用两种方法对含有岩藻多糖的MRS培养基(Man-Rogosa-Sharpe,MRS)进行灭菌后,然后与鼠李糖乳杆菌进行共培养。用集落形成单位检测法(Colony-forming unit assay,CFU检测)观察岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌生长的影响。在研究岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌形态、代谢、生物膜形成和抗菌能力影响的实验中,我们将实验分为4个组,分别为:0 mg/m L组(对照组)、0.8 mg/m L岩藻多糖组、8 mg/m L岩藻多糖组和80 mg/m L岩藻多糖组,使用筛选出较优的灭菌方法对各实验组的培养基进行灭菌。用扫描电子显微镜来观察灭菌岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌形态的影响,并计算其伸长率的变化。通过p H计检测培养基p H值的变化来反应岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌代谢的影响。运用傅里叶变换红外光谱仪对岩藻多糖培养基中培养的鼠李糖乳杆菌化学键进行分析,检测岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌化学键的影响。通过琼脂扩散实验检测不同浓度岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌抗菌作用的影响。通过激光共聚焦显微镜观察岩藻多糖对鼠李糖乳杆菌生物膜形成的影响。使用Origin 8.0软件以单因素方差分析的统计方法对数据进行比较分析。结果:高温高压灭菌的岩藻多糖与过滤灭菌的岩藻多糖红外结果显示出主要特征峰,位于3404(O-H)、2937(C-H)、1640(C=O)、1250(S=O)、1053(C-O-C)和840(C-O-S)cm-1,二者峰值位置一致,无明显差异。过滤灭菌处理和高温高压灭菌后的岩藻多糖分子量分别为276 kDa和77 kDa,高温高压灭菌处理使分子量急剧下降。过滤灭菌处理和高温高压灭菌后的总糖分别为78.61%和70.22%、糖醛酸分别为2.01%和0.90%、硫酸根分别为29.65%和28.42%,单糖的组成比例变化很小甚至无明显变化。岩藻多糖在浓度为0.8 mg/m L下,过滤灭菌组和高温高压灭菌组的鼠李糖乳杆菌CFU计数分别4.1×10~9CFU/m L和4.5×10~9CFU/m L,两组无差异(p>0.05),两组与0 mg/m L组(3.0×10~9CFU/m L)相比,均促进鼠李糖乳杆菌的增殖(p<0.05)。在8 mg/m L的浓度下,过滤灭菌组和高温高压灭菌组的鼠李糖乳杆菌CFU计数分别为4.4×10~9CFU/m L和5.7×10~9CFU/m L,高温高压组明显优于过滤灭菌组(p<0.01),高温高压灭菌中8 mg/m L组鼠李糖乳杆菌CFU计数比0.8 mg/m L组高(p<0.05),与0 mg/m L组有显著差异(p<0.01);在过滤灭菌组中8 mg/m L组的鼠李糖乳杆菌CFU计数与0.8 mg/m L组的无差异(p>0.05)。高温高压灭菌的岩藻多糖与鼠李糖乳杆菌共培养过程中,在最初的8小时内,所有组培养基的p H值均略有降低,随着时间从8h到16h,鼠李糖乳杆菌的培养基p H值降低明显,0、0.8和8 mg/m L组培养基的p H值降低速度明显高于80 mg/m L组,最终p H值低于80 mg/m L组。同时发现,在与灭菌的岩藻多糖共同培养下,0.8 mg/m L组和8 mg/m L组鼠李糖乳杆菌的伸长率(2.43±0.38、2.66±0.48)与0 mg/m L组的(2.56±0.48)无差异,但在80 mg/m L组,鼠李糖乳杆菌形态发生改变,伸长率为3.11±0.69,差异有显著性(p<0.05)。激光共聚焦显微镜测得0 mg/m L组的鼠李糖乳杆菌生物膜厚度为21.85μm,0.8 mg/m L组、8 mg/m L组和80 mg/m L组分别为17.03μm、9.48μm、6.07μm;随着培养基中岩藻多糖浓度的增加,鼠李糖乳杆菌生物膜形成的厚度减少。琼脂扩散实验显示,0 mg/m L组、0.8 mg/m L组、8 mg/m L组对金黄色葡萄球菌抑菌环直径分别为18.15、20.27、21.44 mm,随着浓度的增加抑菌性增强,8 mg/m L组和0.8 mg/m L组与0 mg/m L组有差异(p<0.05),而80 mg/m L为15.41 mm,比其他三组抑菌环直径都小(p<0.05);0 mg/m L组、0.8 mg/m L组、8 mg/m L组对大肠杆菌的抑菌环直径分别为27.0、27.46、28.56 mm,8 mg/m L组与0 mg/m L组有差异(p<0.01),0.8 mg/m L组与0 mg/m L组无差异(p>0.05),而80 mg/m L为19.09 mm,比其他三组抑菌环直径都小(p<0.01);0 mg/m L组、0.8 mg/m L组、8 mg/m L组对粪肠球菌抑菌环直径为23.4、23.3、25.35 mm,8 mg/m L组与0 mg/m L组有差异(p<0.01),0.8 mg/m L组与0 mg/m L组无差异(p>0.05),而80 mg/m L为19.87 mm,比其他三组抑菌环直径都小(p<0.01)。结论:高温高压灭菌处理过程不会使岩藻多糖变性,但会使其分子量降低,同时会使其某些化学组分比例发生改变。岩藻多糖可以促进鼠李糖乳杆菌增殖,高温高压灭菌的岩藻多糖优于过滤灭菌的岩藻多糖。岩藻多糖可促进鼠李糖乳杆菌的生长、代谢和抗菌能力,但与浓度密切相关,并可能存在阈值效应。
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