目的：柔红霉素（DNR）是急性白血病化疗的主要药物，但对正常细胞也有较高的毒副作用。国外已有报道，DNR可诱导U937、KG1、HL-60等细胞株凋亡，但其具体的作用机制还不清楚。本课题以DNR在体外作用急性髓细胞白血病细胞株HL-60为模型，探讨DNR对HL-60的作用及机制，有助于了解DNR的作用规律，可进一步指导临床合理用药，最大限度地消除肿瘤细胞而产生最低限度的毒副作用。 方法：通过光镜、流式细胞仪（FCM）、DNA电泳方法，观察了DNR诱导HL-60的凋亡，及加入活性氧抑制剂PDTC与神经酰胺合成酶抑制剂FB1后，细胞在DNR的作用下发生凋亡的变化；用免疫细胞化学（IC）及FCM检测了DNR作用前后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、C-myc、Caspase-3的表达；用IC、FCM及EMSA检测了细胞内核转录因子NF-κB在DNR作用和与抑制剂共同作用后的表达及活性的变化。 结果：1．当DNR浓度为0.2uM～2uM作用5h时，HL-60细胞发生的凋亡率随浓度的增加而升高，形态学上可见典型的凋亡细胞，DNA电泳结果有明显的DNA梯度条带。浓度至5uM时，凋亡率反而下降；在同一浓度下，凋亡率随DNR作用时间的延长而升高。加入PDTC 重庆医科大学硕士论文 后，用 filM的 DNR作用 HL60 sh，凋亡细胞明显减少，凋亡率较单 纯的DNR作用时降低了73．5％，DNA电泳梯度图象也消失。而加入 FB后，凋亡的检测结果无明显变化。 2．与 DNR作用丽相比，luM DNR作用 Zh 后，Bcl－2、C－myc的 荧光强度指数吓I）降低，Bax、Caspase上的 FI升高；而作用 sh时， Bax、Caspase－3的＊值反而降低。 3．HL＊0细胞组、luM DNR作用 5小时组、PDTC＋DNR组、 FB＋DNR组细胞内 NF4 B检测的结果显示，DNR作用后 NF4 B出 现强阳性表达；加入 PDTC抑制后，NF4 B的 FI值较单纯的 DNR 作用下降了47．68％；加入FB后，FI值仅下降了2．38％。EMSA的 电泳图显示，PDTC抑制组产生的特异性结合条带明显弱于DNR作 用组与 FB抑制组的，而后两者的条带强弱相近。 结论：结果提示：一定浓度的DNR在体外可诱导HL＊0细胞凋 亡，凋亡率与DNR的剂量与作用时间相关；凋亡的机制可能是通过 抑制BclZ与C狈yc蛋白的表达，激活Bax蛋白而诱导的；此凋亡过 程与 ROS、Wb4 B及 Caspase上有关，而与神经酚胺合成酶无关。