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目的:
检测RegⅣ基因在四种大肠癌细胞系、大肠腺瘤、大肠腺癌及胃癌组织中的mRNA和蛋白表达水平,并观察RegⅣ基因的体外抗凋亡作用。初步探讨RegⅣ基因在大肠癌发生和进展中的作用。
方法:
RT-PCR检测RegⅣ在四种大肠癌细胞系中RegⅣmRNA的表达情况;Western-blot检测大肠癌细胞系中Reg Ⅳ蛋白定量;免疫组化检测4株大肠癌细胞系、30例大肠腺瘤、60例大肠腺癌及20例胃癌组织中RegⅣ蛋白及P53蛋白的表达情况;MTT检测4株大肠癌细胞系生长抑制作用;FCM检测4株大肠癌细胞系凋亡率。
结果:
4种大肠癌细胞系中,RegⅣmRNA和蛋白表达从高到低依次是HT-29(0.97±0.02,0.89±0.10),Sw480(0.71±0.08,0.88±0.05),Caco2(0.45±0.01,0.64±0.05),Lovo(0.34±0.01,0.47±0.03);免疫组化RegⅣ蛋白阳性表达依次是HT-29>Sw480>Caco2>Lovo,与细胞凋亡率有明显相关性(r=-0.732,P=0.007)。RegⅣ蛋白在癌旁组织、腺瘤和癌组织的阳性表达率依次是75.00%、86.67%和63.33%,均有显著性差异(P<0.01)。但癌组织与腺瘤间RegⅣ蛋白的表达差异无显著性(P>0.05)。RegⅣ蛋白与大肠癌进展无显著相关性(P>0.05)。大肠癌中P53蛋白表达阳性率66.67%,与RegⅣ蛋白的表达无明显相关性(x<2>=60.00,P=0.839)。RegⅣ蛋白在胃癌组织中的表达率较低(20.00%),与大肠癌(63.33%)相比有显著性差异(x<2>=11.295,P=0.001)。不同浓度的姜黄素对4种细胞系的生长抑制作用强弱依次为Lovo>Caco2>Sw480>HT-29,并呈浓度依赖性;用20umol/L的姜黄素处理24h后,4种细胞系的凋亡率大小依次为Lovo>Caco2>Sw480>HT-29(F=7.86,P=0.009)。
结论:
4株大肠癌细胞系中RegⅣmRNA和RegⅣ蛋白表达水平不同;以HT29细胞表达最强。大肠腺瘤组织中RegⅣ蛋白表达明显高于正常组织,但是当腺瘤发展到腺癌后RegⅣ蛋白表达水平又低于正常组织,推测RegⅣ很可能仅在癌的启动阶段起作用,其可能的机制之一是抗凋亡作用,RegⅣ蛋白表达水平与P53蛋白表达无相关性。与大肠癌的进展也无明显关系。RegⅣ蛋白表达可能具有器官特异性。