论文部分内容阅读
目的：以人主动脉平滑肌细胞(HASMC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为体外细胞模型,研究apelin-13对人主动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响,以及对人脐静脉内皮细胞中细胞间粘附分子(ICAM-1)和血管细胞粘附分子(VCAM-1)表达的影响,目的是为了检测apelin-13对动脉粥样硬化形成过程的影响,及其通过的细胞信号通路。内容：培养人主动脉平滑肌细胞(HASMC),提取总RNA、反转录、PCR检测HASMC细胞中是否有APJ-血管紧张素受体相关的受体蛋白(putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1, APJ)的表达,用不同浓度(0.001μM,0.01μM,1.1μM,1μM,10μM)的apelin-13刺激细胞24,48,72小时,MTT比色法观察apelin-13对人主动脉平滑肌细胞增殖的影响；用不同浓度(0.001μM,0.01μM,0.1μM,1μM,10μM)的apelin-13刺激细胞4小时,通过细胞计数观察apelin-13对人主动脉平滑肌细胞迁移的影响。培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),提取总RNA、反转录、PCR检测HUVEC细胞中是否有APJ的表达,用不同浓度(0.001μM,0.0μM,0.μM,1μM,2μM)的apelin-13刺激细胞1,3,5,8,12,24小时,寻找apelin-13促进人脐静脉内皮细胞VCAM-1, ICAM-1表达的最佳浓度和最适时间；apelin-13以最适浓度和最适时间和Gi蛋白抑制剂PTX或Gq蛋白抑制剂YM254890共同刺激人脐静脉内皮细胞,以LPS为阳性对照来鉴定apelin-13促VCAM-1, ICAM-1表达所通过受体偶联的G蛋白类型；apelin-13与核因子NFκ-B抑制剂BAY11-7082共同刺激细胞,检测NF-κB在apelin-131促VCAM-1, ICAM-1表达中的作用；用apelin-13与和Gi蛋白抑制剂PTX或Gq蛋白抑制剂YM254890共同刺激人脐静脉内皮细胞,检测NF-κB磷酸化情况,进一步检测受体偶联G蛋白类型。结果：测序结果显示在入主动脉平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞中均有APJ受体表达；MTT比色法结果显示apelin-13不能促使人主动脉平滑肌细胞增殖；traswell法细胞迁移结果显示apelin-13不能促使人主动脉平滑肌细胞迁移；Western blot结果显示：apelin-13能够促使人脐静脉内皮细胞中VCAM-1、ICAM-1的表达,并且在浓度为0.1μM时这种促进作用达到最大值,在时间为8h时这促表达作用达到最大值；在apelin-13促VCAM-1、ICAM-1表达过程中,能促使核因子NF-κB的磷酸化,用apelin-13刺激PTX预处理的细胞时,这种促VCAM-1、ICAM-1表达的作用被抑制,而且用apelin-13刺激PTX预处理的细胞时,核因子NF-κB的磷酸化也被PTX所抑制。结论与意义：1)在人主动脉平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞中均有APJ表达。2)apelin-13对人主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移没有影响。3)apelin-13能够促使人脐静脉内皮细胞中VCAM-1、ICAM-1的表达,apelin-13可能通过Apelin-13受体APJ—Gi蛋白—NF-κB信号通路促ICAM-1表达；Apelin-13可能通过Apelin-13受体APJ—-Gi蛋白—NF-κB信号通路促VCAM-1表达；apelin-13在动脉粥样硬化形成早期有促进作用,通过促进内皮细胞中VCAM-1、ICAM-1的表达。本次研究证实apelin在动脉粥样硬化形成早期有作用,这为治疗动脉粥样硬化寻找新的靶点提供新的理论依据,这将为动脉粥样硬化治疗的研究开辟新领域,另外也为肥胖可能导致动脉粥样硬化提供了论据。