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本文采用高分辨率的PCR-SBT分型方法对中国南方汉族人群81例IgA肾病患者和98例正常对照者进行HLA-DPB1基因多态性的研究,以了解与IgAN相关的易感和/或保护基因,从发病机制、临床表现、病理类型等方面明确IgA肾病与HLA-DPB1基因的关联性。
在IgAN患者中共检测到15种HLA-DPB1等位基因,其中DPB1*0501分布频率最高,为62.9%,其次为DPB1*0202(9.9%),DPB1*020101(9.3%)和DPB1*1301(4.9%)。采用病例—对照研究发现患者组中HLA-DPB1*0501基因频率明显升高,与对照组相比有显著差异(P=0.0002,OR=2.205),HLA-DPB1*030101及HLA-DPB1*1301等位基因频率下降,与对照组相比差异具有显著性(分别为P=0.003,OR=0.086;P=0.03,OR=0.406)。同时将患者分为DPB1*0501基因阳性组和阴性组,了解各临床和病理指标与IgAN的关联性。发现在高血压组,蛋白尿组(尿蛋白>1.0g/24h),肾功能减退组(Scr>133umol/L或GFR<60ml/min),血脂升高组,血清IgA升高组均无明显差异;同样在Hass分级、新月体形成、肾间质损害、肾小管萎缩、肾血管病变等各病理指标方面亦无明显差异。我们又根据DPB1*0501阳性和阴性(用N*0501表示)的不同情况将患者分为三种基因型,即:HLA-DPB1*0501/*0501,*0501/N*0501和N*0501/N*0501,采用多因素Logistic回归分析发现排除了性别和年龄因素后,DPB1*0501/0501基因型与N*0501/N*0501基因型相比,在高血压组有显著差异(P=0.048,OR=0.195,95%CI0.039-0.098)。
据此可以推断HLA-DPB1*0501等位基因与IgAN的发病相关,可能为IgAN的易感基因,而HLA-DPB1*030101及HLA-DPB1*1301等位基因可能为IgAN的抵抗基因;HLA-DPB1*0501/*0501基因型可能与IgAN患者的高血压症状相关联。同时HLA-DPB1等位基因与IgAN的病理表现无关联性。
在PCR-SBT分型过程中发现一个样品无法明确分型,重复PCR及测序发现同样结果。对其进行克隆鉴定分析后提示为一个新的HLA-DPB1等位基因。于是向GenBank提交序列,获得序列号DQ20645,并向WHO命名委员会申请命名,于2006年2月获得命名为DPB1*1702。这个新等位基因第而外显子碱基及氨基酸序列的比对结果显示,DPB1*1702与DPB1*2501、DPB1*3601、DPB1*5201各有三个碱基的差别,导致相应氨基酸序列的改变。序列比对结果提示该新等位基因的产生为等位基因内部的基因转换所致。同时对患者及其家属进行了基因分型和临床检查显示,单体型DPB1*1702-DQB1*030101来自于患者的父亲;患者其他家庭成员尿检均为正常,提示该患者为散发性IgAN。该新等位基因的发现显示了PCR-SBT分型方法的优越性,同时进一步丰富了HLA抗原的数据库,对今后的HLA多态性研究具有重要的应用价值。