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目的1.探讨高危人乳头瘤病毒(HPV)感染患者中端粒酶检测与宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断的相关性及临床意义。2.探讨端粒酶表达与人染色体端粒酶基因(hTERC)扩增在CIN中的相关性。3.探讨高危HPV亚型感染的CIN患者中,端粒酶检测在随访中的临床意义。方法一.病例选择选择在2008年7月至2010年1月期间就诊于济南军区总医院妇科门诊的宫颈病变患者55例：其中25例CIN为研究组,包括CINⅠ8例,CINⅡ10例,CINⅢ7例；18例宫颈癌为阳性对照组,包括Ⅰb期1例,Ⅱa期9例,Ⅱb期8例；慢性宫颈炎12例为阴性对照组。患者年龄为17岁-70岁,中位年龄43.5岁。上述患者均以组织病理学为最终诊断标准。二.研究方法上述患者均采用免疫组织化学SP法检测宫颈病理组织端粒酶活性,采用导流杂交基因芯片法进行宫颈脱落细胞HPV亚型检测,并对25例CIN患者于高频电环切术(LEEP)治疗术前均行薄层液基细胞学检查(TCT),治疗后3个月及6个月时行脱落细胞TCT及HPV亚型检测。并与已有的25例CIN患者宫颈脱落细胞hTERC基因检测结果相对照[采用荧光原位杂交技术(FISH)检测]。三.统计分析：1.端粒酶阳性表达及HPV表达在CIN各级别的表达情况,均采用SPSS13.0软件,运用Kruskal-Wallis检验或及Logistic回归方程。2.对比研究端粒酶的检测结果与我科已有的hTERC基因的检测结果在诊断CIN中的相关性,用SPSS13.0软件,采用行×列的χ2检验。3.端粒酶阳性表达的CIN患者的随访情况。以上三组研究,检验水准均为a=0.05,P<0.05存在统计学意义。结果1.本研究55例患者中,HPV亚型检测结果:HPV高危亚型者31例,HPV阴性者24例。端粒酶活性表达的结果：阳性表达者35例,阴性者20例。hTERC基因异常扩增表达情况(已有的结果)：25例CIN阳性扩增者16例,阴性9例。随访3月时HPV感染的患者阳性1例,HPV阳性1例,TCT结果异常2例,随访到6月时HPV阳性及TCT结果异常各1例。2.端粒酶阳性表达及HPV感染在CIN中各级的表达情况：端粒酶阳性表达在组织病理学各分级中：宫颈浸润癌组分别与炎症组、CINⅠ和CINⅡ/CINⅢ组比较,阳性表达率增高,差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅡ/CINⅢ与炎性组比较,端粒酶阳性表达率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着组织病理学分级的递升,高危HPV的阳性表达率增加。组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌组中高危HPV感染率明显高于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组与CINⅠ、CINⅡ组相比,高危型HPV感染的阳性率增高,差异有统计学意义(P<0.05)。在高危HPV感染的组织中,端粒酶阳性表达随着组织病理学分级的升高而升高。其中宫颈癌及CINⅢ与CINⅠ比较,端粒酶阳性表达率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅢ及宫颈癌与CINⅡ比较,端粒酶阳性表达率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV阳性的人群中端粒酶阳性表达率是HPV阴性人群的9.134倍。表5为端粒酶与高危HPV在CIN中阳性率的比较,端粒酶在CINⅡ/CINⅢ中的阳性率高于高危HPV的阳性率,差异有统计学意义(P<0.05)。从表6中可以看出,高危HPV感染及端粒酶全阳性者为28例,这28例病理诊断为CIN及CIN以上病变,高危HPV感染阳性但端粒酶表达阴性患者3例,其病理诊断为CINⅠ、CINⅡ及炎症。端粒酶及HPV全阳性在组织病理学分布情况与高危HPV感染阳性但端粒酶阴性的组织病理学分布情况是不同的。两者均阳性患者的病理学结果为CIN及CIN以上病变,高达100%。提示：在高危HPV感染的患者中,如果其端粒酶检测为阳性,其病理结果为CIN以上病变的可能性极高。3.对比研究端粒酶在CIN中的检测结果与我科已有的hTERC基因的检测结果：宫颈组织中端粒酶表达随着CIN级别升高而升高,两者相关系数为rs=0.811,hTERC基因扩增随着CIN级别的升高而升高,两者相关系数为rs=0.934。从此表8可以看出,端粒酶及hTERC基因扩增在CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ组中具有高度一致性(P>0.05)。4.CINⅠ患者8例,高危HPV及端粒酶均阳性者2例,LEEP术后3月及6月随访时,HPV及TCT结果均正常。CINⅡ患者10例,高危HPV及端粒酶均阳性者3例,1例端粒酶及HPV感染均阳性的患者LEEP术后3月随访结果为：TCT为意义不明确的不典型鳞状上皮细胞(ASC-US),高危HPV转阴,此例患者术后6月时HPV阴性,TCT结果正常,余患者随访结果正常。CINⅢ患者7例,高危HPV及端粒酶均阳性者6例,其中1例患者术前端粒酶及高危HPV阳性LEEP术后3月随访时,HPV16持续阳性,TCT结果为ASC-US。术后6月随访时,这例患者HPV 16持续阳性,其TCT结果为ASC-US,余患者随访结果正常。结论1.端粒酶阳性表达在高危HPV亚型感染的CIN患者中随着CIN级别的升高而表达升高。高危HPV亚型感染可能为引起端粒酶阳性表达的危险因素之一。2.端粒酶对高级别CIN的检出率高于高危HPV,高危HPV患者端粒酶检测能够提高CIN检测结果的阳性率,与CIN的病理诊断具有较好的一致性。3.CIN中端粒酶阳性表达与hTERC基因异常扩增相一致,均呈高表达。4.高危HPV感染的CIN患者中,端粒酶表达阳性的,其预后较差,临床诊治中应予以高度重视。