目的:喜树碱类药物是目前临床上广泛应用的拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)抑制剂,开发研究低毒有效的此类药物是近年来研究的热点。研究表明喜树碱类药物具有抑制肿瘤细胞、血管内皮细胞及角质形成细胞增殖并诱导其分化、凋亡的作用,从而达到抗肿瘤、抗良性增生性疾病的治疗目的。本实验以一种新的喜树碱类化合物—喜树异碱作用于舌鳞癌Tca8113、人脐静脉血管内皮细胞ECV-304及人角质形成细胞colo-16,观察喜树异碱对细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用,探讨其抗肿瘤及抗银屑病的作用及可能机理,为该药治疗肿瘤和银屑病奠定实验基础。方法:体外培养Tca8113、Hela、ECV-304及colo-16细胞,将不同浓度的喜树异碱与上述四种细胞分别作用24、48、72小时。用MTT法检测喜树异碱对细胞增殖的抑制作用及有效浓度范围。倒置显微镜观察加药前后细胞的形态变化。流式细胞仪检测分析喜树异碱对Tca8113、ECV-304及colo-16细胞周期的影响及诱导凋亡的作用;AnnexinⅤ-PI法定量检测colo-16细胞早期凋亡情况。结果:(1)喜树异碱在试验浓度内对Tca8113、Hela、ECV-304及colo-16细胞的增殖均有明显的抑制作用,作用24、48、72小时,抑制Tca8113细胞的IC50分别为78.19、73.12、61.36μg/ml。抑制Hela细胞的IC50分别为80.23、76.02、64.29μg/ml。抑制ECV-304细胞的<WP=5>IC50分别为76.38、71.65、59.57μg/ml。抑制colo-16细胞的IC50分别为76.12、68.42、57.84μg/ml。喜树异碱对这些细胞的抑制作用在一定浓度范围内有明显的时间和剂量依赖性。(2)倒置显微镜下观察喜树异碱作用后的细胞,单位面积的细胞数量明显减少,细胞体积变小、变圆,细胞膜完整但形状不规则。(3)喜树异碱可影响Tca8113和ECV-304的细胞周期,将细胞明显阻滞于S期,并表现出一定的时间和剂量依赖性。(4)喜树异碱能干扰角质形成细胞colo-16的细胞周期,将细胞阻滞于S期和G2期,且随着浓度和时间的增加S期和G2期的比例也不断上升。浓度为31.25、50μg/ml时出现了凋亡峰,比例分别为1.3%、4.9%;50μg/ml作用 24、48 小时,凋亡比例分别为1.5%、5.6%。(5)AnnexinⅤ-PI法检测50μg/ml喜树异碱作用48小时colo-16细胞早期凋亡比例为4.45%。(6)喜树异碱抑制角质形成细胞colo-16和血管内皮细胞ECV-304增殖的浓度小于抑制舌鳞癌Tca8113细胞和宫颈癌Hela细胞的浓度。结论:(1)喜树异碱对Tca8113细胞、Hela细胞的增殖有抑制作用,这种抑制作用有明显的时间和剂量依赖性;且能影响Tca8113的细胞周期,将其阻滞于S期,提示该新的喜树碱类化合物具有抗肿瘤的作用,其抗肿瘤机制可能与影响细胞周期有关。(2)喜树异碱对血管内皮细胞ECV-304有增殖抑制作用,这种抑制作用有明显的时间和剂量依赖性;且可影响ECV-304的细胞周期,将其阻滞于S期,并表现出一定的剂量依赖性,提示其作为一种潜在的血管拮抗剂值得进一步研究。(3)喜树异碱可抑制角质形成细胞colo-16的增殖,这种抑制作用有明显的时间和剂量依赖性;且能干扰角质形成细胞colo-16的细胞周期,能将细胞阻滞于S期和G2期,并诱导colo-16凋亡,说明其可能对银屑病的治疗有一定作用。(4)喜树异碱抑制角质形成细胞colo-16和血管内皮细胞ECV304增殖的浓度小于抑制肿瘤细胞Tca8113的浓度,提示相对小剂量的喜树异碱可能对银屑病即有治疗作用。