背景与目的 原发性肝细胞癌是我国最常见的恶性肿瘤，在癌症死因中所占的位次居第2位，每年有11万人死于肝癌，并且肝癌的发生率仍在持续上升。虽然现代诊疗技术有了长足进步，但是肝癌的预后仍不容乐观。其中，最主要的原因之一在于：肝内的侵袭性播散和远处的转移，造成肝癌难以切除或术后的复发，所以寻找准确评估肝癌原发灶转移能力和预后的肿瘤标记物，对肝癌转移的诊断、治疗都具有重大意义。原发性肝癌的病理学特点是细胞外基质丰富，大约80％的原发性肝癌被纤维结缔组织包裹。所以，原发性肝癌要发生侵袭和转移，降解细胞外基质、穿透基底膜是关键性的一步，而基质金属蛋白酶（MMPs）在这过程中起着关键性的作用。 MMPs是一类蛋白结构近似，编码基因与胶原酶基因同源的蛋白分解酶家族，至少包括16种对细胞外底物具有催化活性的末端肽酶，且具有以下特征：能分解细胞外基质的一种或多种成分；以胶原形式分泌，须经活化后才具有蛋白水解酶的活性；在活化位点上含锌离子，而且能被螯合剂阻断；酶在中性pH时有最好 浙江大学硕士学位论文的催化功能，并可被基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPS）所抑制；它们具有同源的氨基酸序列。其中，MMP。2（明胶酶A）和MMPg（明胶酶B）是分解基质中IV型、V型胶原的最主要的基质金属蛋白酶，这是因为不但外周基质中存在IV型胶原，同时IV型胶原也是基底膜的主要成分之一。虽然，在MMPS中，MMP．2和MMP，9的结构最近似的，但是，MMP－9基因中有48个碱基序列是其它基质金属蛋白酶所没有的，这种差异可能导致MMP－二和MMP－9在肝癌组织和癌旁组织中出现不同的表达。 逆转录聚合酶链反应（reverse transcription－polymerase chain reaction，RT－PCR）是新近迅速发展起来的RNA诊断技术。其原理是从某一特定基因有表达的组织中提取总的RNA，经逆转录反应生成cDNA，然后在特异于该基因的外显子引物对的指引下进行PCR，扩增的产物经凝胶电泳分离后，再经光电密度扫描计算出相应的RNA含量，具有准确、敏感、简便的特点。 方 法 本研究通过RTPCR法，以8．actin为内对照，对扩增以后的28例肝癌组织和癌旁组织 MMP－2基因和 MMP－9基因表达的吸光度值来分析：（l）MMP－2基因表达在肝癌组织和癌旁组织中表达是否有差异；（2）MMP．9基因表达在肝癌组织和癌旁组织中表达是否有差异；（3）MMPZ基因表达与术前AFP水平、肿瘤大小、门静脉癌栓、病理分期等临床病理指标的关系；（4）MMP－9基因表达与术前AFP水平、肿瘤大小、门静脉癌栓、病理分期等临床病理指标的关系；（5）统计学分析：运用SSPS10刀统计软件包进行t检验分析MMP－2基因与MMP－9基因在肝癌组织中是否存在表达异常以及二者表达的相关性。 2 浙江大学硕土学位论文 结 果 1、MMP－ZmRNA在肝癌组织中和癌旁组织中均有表达，且其表达水平有显著性差异（P＜0．of）。MMP－ZmRNA表达水平与术前 AFP、肿瘤大小、WIM分期和门静脉癌栓形成无相关性（P＞0刀5）。 2、MMPgmRNA在肝癌组织和癌旁组织中均有表达，并且，表达水平有显著性差异（P＜0刀1），其表达水平与门静脉癌栓组密切相关（P＜0刀1），但与术前＊FP、肿瘤大小、TN M分期无相关性（P＞O．05）。 3、MMPZmRNA和 MMP－gmRNA在肝癌组织中的表达水平有显著性差异 （P＜0刀1），并经相关性检验（卜0刀1），证明两者表达存在正相关性。 结 论 1、MMP－2基因在原发性肝细胞癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，说明MMP－2与肝癌的恶性生物学行为存在一定的相关性。 2、MMP－9基因在原发性肝细胞癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，并与门静脉癌栓形成呈正相关，说明MMPg基因与肝癌的血行转移，扩散密切相关；可以作为临床上检测肝癌侵袭与转移的指标。 3、MMP－2基因与MMPg基因在肝癌组织中的表达水平不同，并且有相关性，提示MMP－9作为转移性指标更为敏感。