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由于科学技术的不断进步和医药行业的迅速发展,涌现出了大量的新药。为了严格监控药品的质量,必须采用良好的分析方法对其进行测定。原有的分析方法由于选择性差、灵敏度低以及操作复杂等原因,有的正逐渐被取代。随着各种新型仪器的问世以及各种检测手段的提高,建立具有更高的灵敏度、更好的选择性、试样用量少、操作简单的分析方法成为分析工作者的研究热点。由于荧光分析法具有灵敏度高、选择性好、检测限低等优点,故在环境、药物及生化等领域得到广泛应用。但是很多药物没有荧光特性或荧光信号微弱,无法用直接荧光法进行定量分析。通过实验研究,拟建立一些间接荧光分析新方法来测定此类药物,并研究了药物与体系之间的猝灭机理。该研究不仅为一些药物的荧光测定提供了可能性,而且延伸了荧光分析法的应用范围。本文首先对荧光分析法进行了综述,然后通过荧光猝灭法对一些无荧光特性或内源性荧光较弱的药物进行了研究。以牛血清白蛋白、5-溴水杨基荧光酮、碳量子点和曙红Y为荧光探针,对其与柳氮磺吡啶、头孢克肟、盐酸头孢他美酯、Cr(Ⅵ)及盐酸氯丙嗪之间的相互作用的荧光光谱进行了研究,确立了荧光猝灭新方法来测定上述药物,并将这些新方法用于实际样品的分析中。此外,探讨了药物与体系之间的猝灭机理。主要内容如下:1.本文用荧光猝灭法对柳氮磺吡啶与牛血清白蛋白之间的相互作用进行了研究。结果发现在p H=7.40的硼酸-硼砂缓冲溶液中,柳氮磺吡啶使牛血清白蛋白的荧光强度显著降低,且降低值ΔF与柳氮磺吡啶的浓度在一定范围内呈良好的线性关系,线性方程为F=3.03×109c(mol/L)+20.20(r=0.9980),检出限为7.2×10-10mol/L,相对标准偏差为0.43%(n=5,c=4.0×10-8 mol/L)。将该法用于片剂中柳氮磺吡啶的测定,结果令人满意,回收率为96.3~104%。通过测定有无猝灭剂时的荧光寿命、探讨不同温度对猝灭常数的影响以及紫外吸收光谱的变化,确定了柳氮磺吡啶与牛血清白蛋白之间的猝灭过程为静态猝灭;根据F?rster理论计算出柳氮磺吡啶与牛血清白蛋白之间的结合距离为4.39 nm;通过Van’t Hoff方程计算出柳氮磺吡啶与牛血清白蛋白之间的热力学参数,表明二者之间是自发进行的,且主要作用力类型为氢键和范德华力;此外,应用同步荧光法进一步研究了柳氮磺吡啶对牛血清白蛋白构象的影响。2.在p H=3.80的醋酸-醋酸钠缓冲体系下,用荧光猝灭法对牛血清白蛋白与头孢克肟之间的相互作用进行了探究。结果发现头孢克肟使牛血清白蛋白的荧光强度显著下降,且当头孢克肟的浓度在8.0×10-9~1.2×10-7 mol/L范围内时,体系在λem=342nm处的荧光猝灭值ΔF和头孢克肟的浓度呈良好的线性关系,据此建立一种测定头孢克肟的荧光猝灭新方法。该方法的线性方程为F=1.9×109c(mol/L)+5.65(r=0.9994),检出限为2.0×10-9 mol/L,相对标准偏差为0.86%(n=5,c=8.0×10-8mol/L)。将该法用于片剂中头孢克肟的定量测定,结果令人满意,加标回收率为94.5~97.3%。通过测定荧光寿命、探讨不同温度对猝灭常数的影响以及紫外吸收光谱的变化,确定了牛血清白蛋白与头孢克肟之间的猝灭过程为静态猝灭。通过计算热力学参数,表明了牛血清白蛋白与头孢克肟之间的相互作用是自发过程,且二者之间的主要作用力类型为范德华力或氢键;根据F?rster理论计算出牛血清白蛋白与头孢克肟之间的结合距离为2.14 nm;此外,同步荧光法表明头孢克肟引起了牛血清白蛋白构象的变化。3.在p H=7.40的磷酸盐(PBS)缓冲溶液中,以5-溴水杨基荧光酮为荧光试剂,建立了一种荧光猝灭法测定盐酸头孢他美酯的新方法。该方法的线性回归方程为ΔF=12.14×109c(mol/L)+25.06(r=0.9944),线性范围为8.0×10-10~1.8×10-8 mol/L,检出限为3.8×10-10 mol/L,相对标准偏差为1.8%(n=5,c=8.0×10-9 mol/L)。用该法对市售片剂中盐酸头孢他美酯的含量进行定量测定,回收率为98.0~104%。通过测定荧光寿命、探讨不同温度对猝灭常数的影响以及紫外吸收光谱的变化,确定了盐酸头孢他美酯与5-溴水杨基荧光酮之间的猝灭过程为静态猝灭。4.在p H=2.80的Britton-Robinson(B-R)缓冲介质中,以曙红Y为荧光试剂,建立了一种荧光猝灭法测定盐酸氯丙嗪的新方法。在选定的实验条件下,该法测定盐酸氯丙嗪的线性范围为8×10-8~8.2×10-6 mol/L,检出限为1.6×10-9 mol/L,相对标准偏差为1.3%(n=5,c=1.2×10-6 mol/L)。用该法对片剂中盐酸氯丙嗪的含量进行定量测定,回收率为98.6-105%。此外,通过测定荧光寿命、探讨不同温度对猝灭常数的影响以及紫外吸收光谱的变化,确定了曙红Y与盐酸氯丙嗪的之间的猝灭机理。5.以牛血清白蛋白作为碳源,采用一锅法直接酸化合成碳量子点,并通过荧光光谱和紫外吸收光谱对其进行表征。在p H=7.40的三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲介质中,用同步荧法研究了碳量子点与Cr(Ⅵ)之间的相互作用。结果表明,Cr(Ⅵ)使碳量子点的同步荧光强度降低,加入十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)后,体系的同步荧光猝灭值ΔF进一步增大。当Cr(Ⅵ)浓度范围在2.4×10-6~8.0×10-5mol/L时,体系的同步荧光猝灭值ΔF与Cr(Ⅵ)浓度呈良好的线性关系,线性方程为ΔF=4.4×106c(mol/L)+21.58(r=0.9953),检出限为8.4×10-7 mol/L,相对标准偏差为0.58%(n=5,c=4×10-5 mol/L)。用该法测定模拟废水和延河水中的Cr(Ⅵ),结果令人满意。此外,通过探讨不同温度对猝灭常数的影响以及紫外吸收光谱的变化,确定了碳量子点与Cr(Ⅵ)之间的猝灭机理。