线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,MFN2)是线粒体外膜上的一种跨膜蛋白,具有促进线粒体融合的作用。MFN2可通过多种途径阻遏细胞周期和抑制细胞增殖,并且参与细胞凋亡,但在卵母细胞和胚胎中是否有类似作用目前还不清楚。本研究旨在研究Mfn2基因对小鼠卵母细胞周期的影响。首先,以小鼠卵巢为实验材料,根据NCBI上公布的小鼠Mfn2的CDS序列信息,利用RT-PCR的方法克隆了小鼠的Mfn2基因,并构建了真核表达载体pMfn2-Venus,经过一系列筛选鉴定,其基因的表达产物能准确定位到人Hela细胞的细胞质中,并且体外转录的Mfn2-Venus RNA显微注射到小鼠卵母细胞后,其融合蛋白能准确定位在小鼠卵母细胞胞质中,说明载体构建成功;其次,利用免疫荧光染色的方法检测了体外成熟不同阶段小鼠卵母细胞中MFN2蛋白的表达情况,发现MFN2在卵母细胞成熟发育不同时期均有表达;最后分别通过超表达和抑制的手段初步研究了Mfn2在小鼠卵母细胞体外成熟过程中的作用。结果,超表达和抑制Mfn2均可降低小鼠卵母细胞体外成熟,引起生发泡破裂(Germinal Vesicle Breakdown,GVBD)和第一极体排出(the first Polar Body Extrusion,PBE1)发生率显著降低。我们分别收集了Mfn2后阻滞于生发泡(Germinal Vesicle,GV)期的卵母细胞和未排极体的卵母细胞,用JC-1探针检测其线粒体膜电位。发现未排极体的卵母细胞膜电位降低。同时,我们分别统计了Mfn2 morpholino(Mfn2 MO)注射组和对照组中正常和异常的纺锤体形态的比例,结果Mfn2 MO注射组和对照组中正常和异常的纺锤体比例无显著差异。说明,Mfn2引起卵母细胞周期阻滞跟纺锤体的形成无关,可能是Mfn2影响线粒体能量代谢导致的。具体机制还有待进一步的研究探讨。