益气活血消癥方对COPD成纤维细胞增殖和炎性因子表达影响的研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hayyangxiong
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研究背景:慢性阻塞性肺疾病作为一种常见的呼吸系统疾病,是一种可预防和治疗的疾病。近年来慢阻肺患病率逐渐上升,患者生活质量低、社会经济负担较重,成为全球关注的公共卫生问题。目前研究表明,COPD的发病机制主要有炎症反应、蛋白酶/抗蛋白酶失衡、氧化/抗氧化失衡等。COPD的特点是炎症因子、多种蛋白酶的水平提高,NF-κ B诱导多种炎性细胞分泌如集落刺激因子、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、粘附分子等多种炎性因子的表达,参与了气道慢性炎症反应的众多环节,在一定程度上促进了炎症的发生发展,引起组织的病理性改变或者损伤,并最终导致炎症反复发作甚至迁延不愈以及气管受损。根据中医的络病理论和癥瘕理论,王琦教授提出“微型癥瘕痹阻肺络”病机假说,并据此拟定益气活血消癥方治疗COPD。本课题组前期临床实验表明,益气活血消癥方能改善COPD稳定期患者肺功能、血流变指标;前期动物实验表明,益气活血消癥方能够通过调节COPD模型大鼠气道上皮细胞的蛋白酶/抗蛋白酶失衡改善气道重构;益气活血消癥方亦能降低COPD模型大鼠血清中TNF-α、IL-7、IFN-γ的含量、提高大鼠肺功能。本实验在前期实验研究的基础上,欲探索益气活血消癥方含药血清对COPD气道重构中成纤维细胞的增殖、炎性因子的影响及其作用机制,基于NF-κ B经典信号通路从分子生物学角度寻找益气活血消癥方含药血清可能的作用靶点。研究目的:实验一:构建LPS体外刺激成纤维细胞MRC-5的增殖模型。实验二:探究益气活血消癥方的方药精髓,基于NF-κ B信号通路,探讨该方在成纤维细胞炎性因子表达中的可能作用靶点,为COPD气道炎症反应、气道重构的“微型癥瘕痹阻肺络”假说提供依据。研究方法:实验一:以不同浓度LPS体外干预MRC-5细胞24h,CCK-8检测细胞增殖情况。实验二:将益气活血消癥方拆分为益气消癥通络方与益气活血化痰方,Wistar大鼠24只随机分为4组,空白组12只、益气活血消癥组4只、益气消癥通络组4只、益气活血化痰组4只,对应予生理盐水和益气活血消癥方、益气消癥通络方、益气活血化痰方灌胃7天,腹主动脉取血制备含药血清;MRC-5细胞培养种板后按照分组给予LPS、含药血清及布地奈德分别干预24h,检测细胞增殖情况及TGF-β 1、TNF-α、IL-6、p65、IKKβ 的表达情况。研究结果:实验一:LPS浓度在100-2000ng/ml可以刺激MRC-5体外增殖,500ng/ml刺激MRC-5增殖最佳。实验二:1.与模型组相比,益气活血消癥方可以抑制LPS刺激的MRC-5细胞增殖,抑制细胞分泌TGF-β、TNF-α、IL-6,抑制细胞p65、IKKβ生成;2.与模型组相比,益气消癥通络方可以抑制LPS刺激的MRC-5细胞增殖,抑制细胞分泌TNF-α、IL-6,抑制细胞p65、IKKβ生成;3.与模型组相比,益气活血化痰方可以抑制LPS刺激的MRC-5细胞分泌TNF-α、IL-6,抑制细胞p65、IKK β生成;4.与模型组相比,Bud可以抑制LPS刺激的MRC-5细胞增殖,抑制细胞分泌TGF-β、TNF-α、IL-6,抑制细胞p65、IKKβ生成;5.与益气消癥通络组相比较,益气活血消癥组对抑制MRC-5细胞增殖及IL-6的表达作用更明显;对于抑制TNF-α、p65、IKKβ的表达,两组作用相当;益气消癥通络方对TGF-β的表达无明显影响;6.与益气活血化痰组相比较,益气活血消癥组对抑制IL-6、p65、IKK β的表达作用更为明显;对于抑制TNF-α的表达,两组作用相当;益气活血化痰组对MRC-5增殖及TGF-β的表达无明显影响;7.与Bud组相比较,益气活血消癥组对抑制MRC-5细胞增殖及IL-6、p65、IKKβ的表达作用更为明显;对于抑制TGF-β、TNF-α的表达,两组作用相当。研究结论:实验一:LPS可以体外刺激成纤维细胞增殖。实验二:益气活血消癥方可以抑制MRC-5的增殖及炎症因子如TGF-β、TNF-α、IL-6的表达,该作用可能与下调NF-κ B信号通路的活性相关;布地奈德对于抑制成纤维细胞增殖及抑制p65、IKKβ、IL-6表达作用不如益气活血消癥方;作为合方的益气活血消癥方对抑制成纤维细胞的增殖及炎性因子的表达作用更明显。本实验证实了“微型癥瘕痹阻肺络”假说瘕聚形成癥积的合理性,并证明益气活血消癥方对COPD炎症反应的抑制作用。
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