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目的:观察滋肾活血方对阿霉素肾纤维化模型大鼠血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)干预作用与肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,进一步探讨其减轻肾纤维化的机制,为临床防治肾纤维化提供理论依据。
方法:参照文献,采用右侧肾切除加重复尾静脉注射阿霉素制备肾纤维化大鼠模型。将60只健康清洁级Wister大鼠,雌雄各半,体重200±20g,随机分为5组即空白对照组(空白组)、假手术组(只暴露肾脏不做肾脏手术切术)、模型组(肾病模型组)、中药组(滋肾活血血颗粒)和西药组(卡托普利组),每组12只。用2%戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔麻醉后,施行右侧肾脏切除术,在术后第7天,将已行手术的36只大鼠。并予尾静脉注射阿霉素(5mg/kg),术后第14天重复注射阿霉素(3mg/kg),假手术组则尾静脉注射等量生理盐水,空白对照组不做处理。
中药组、西药组在重复注射阿霉素后,分别予滋肾活血颗粒悬浊液10ml/kg/d灌胃和卡托普利液10ml/kg/d灌胃,连续8周。假手术组、模型组同时均予0.9%生理盐水5ml/kg/d灌胃。四组大鼠给药方法和方式相同,空白组不予处理,所有动物均自由饮水和饮食。于实验8w末收集24小时尿液测尿蛋白(pro)定量;用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后开腹,从腹主动脉采血,检测血清尿素氮(Bun)、肌酐(Scr)、HA和LN;取血后立即分离出左侧肾脏,将其切除。将所取肾脏进行组织病理切片、染色及免疫组化检测。
结果:
(1)对24hPro定量的影响:与空白组、假手术组相比,模型组和两治疗组24hPro均有统计学意义(P<0.01),与模型组比较,两治疗组24hPro有明显下降有统计学意义(P<0.01);中药组与优于西药组有统计学意义(P<0.01)。
(2)对BUN、Scr的影响:与空白组、假手术组比较,模型组Bun、Scr均明显升高,有统计学意义(P<0.01);两治疗组与模型组相比均有明显的降低,有统计学意义(P<0.01);中药组和西药组Bun相比无统计学意义(P>0.01),中药组和西药组Scr相比有统计学意义(P<0.01)。
(3)对各组大鼠血清HA、LN含量的影响:模型组血清HA、LN较空白组、假手术组显著升高(P<0.01);两治疗组与模型纽相比,均有明显降低(P<0.01);中药组和西药组均有明显差异(P<0.01)。
(4)各组大鼠肾组织形态学的观察:模型组:肾小囊扩张,肾小球基底膜中至重度增厚,内有较多的免疫复合物沉积,有假双轨征形成,系膜基质增生,部分肾小球周围纤维化和球性硬化;肾小管上皮细胞融合或脱落裸露,肾小管管腔萎缩,管腔可见蛋白管型;肾间质轻度纤维化;偶见小动脉血栓形成。两治疗组大鼠肾组织纤维化病理表现较轻:肾小球基底膜轻度增厚,系膜轻度基质增生,肾小管部分上皮细胞融合或脱落,肾间质偶见局灶性淋巴细胞浸润,间质有轻度纤维化趋势.图像分析显示:模型组肾纤维化程度较重;西药组、中药组与模型组比较,肾纤维化的程度较轻,且中药组肾纤维化的程度相对于西药组轻。
(5)各组肾组织TGF-β1表达的比较:空白对照组和假手术组TGF-β1的表达水平几乎没有差异(P>0.05);模型组则明显高于空白对照组和假手术组,两者之间有显著差异性(P<0.01);中药组与空白对照组相比较,两者间TGF-β1表达水平的差异有统计学意义(P<0.01),但与模型组相比,中药组的表达水平明显低于模型组,有显著性差异(P<0.01),而且中药组又较西药组表达水平低,有显著性差异(P<0.01)。
结论:
(1)滋肾活血颗粒能够减少阿霉素大鼠模型血清HA、LN表达,减轻病变肾组织ECM成分的积聚,延缓肾纤维化的进程;
(2)滋肾活血颗粒能抑制肾组织TGF-β1的表达,从而使病变肾组织ECM合成减少,其作用机制与影响HA、LN和TGF-β1的过度表达有关。