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慢性粒细胞白血病（Chronic myeloid leukemia, CML）是一种起源于骨髓造血干细胞的恶性克隆性疾病。bcr-abl融合基因是CML的遗传学特征， bcr-abl融合基因转录并翻译成具有高酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白，从而激活下游PI3K/Akt、RAS/MAPK、STAT5等多条信号转导通路，导致血细胞的恶性转化。慢性期到急变期转变是慢性粒细胞白血病（ Chronic myeloid leukemia, CML）的致死性进展，其根本原因是bcr-abl融合基因的扩增及白血病干细胞（leukemic stem cell，LSC）的产生，而Wnt/β-catenin信号通路在CML的LSC自我更新中起到重要作用，因此BCR-ABL扩增后激活β-catenin通路可能是CML急变的原因之一，但其机制尚不清楚。 目的：研究CML中BCR-ABL扩增导致Wnt/β-catenin信号通路激活的分子机制及其与CML急变之间的关系，明确β-catenin信号通路激活是否受BCR-ABL扩增激活的PI3K/Akt通路的调节，为寻找靶向CML急变的源头-LSC治疗策略提供新思路。 方法：⑴采用定量PCR和Western blot检测BCR-ABL和β-catenin在CML急变期、慢性期病人骨髓标本中的表达，以及在CML急变期细胞株及bcr-abl融合基因(P210)转化细胞株(BaF3-P210、32D-P210)中的表达情况，了解BCR/ABL扩增、PI3K/Akt通路激活与β-catenin激活的初步关系，为后续实验研究奠定基础。⑵分别采用三种抑制剂，BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂--甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate, IM)， PI3K激酶抑制剂--LY294002及AKT激酶抑制剂--AKTiⅣ，抑制K562细胞中BCR-ABL/PI3K/AKT通路，通过 Western blot、定量 PCR、免疫荧光检测细胞中磷酸化β-catenin(p-β-catenin)、磷酸化 GSK-3β(p-GSK-3β)、总β-catenin、总GSK-3β的变化，β-catenin的核浆定位及下游癌基因c-myc，cyclinD1的表达；体外克隆形成实验观察细胞自我更新能力的改变，放线菌酮处理检测β-catenin的蛋白稳定性，定量PCR检测β-catenin的mRNA水平；并使用PI3K/AKT通路激活剂IGF-1，观察细胞中p-β-catenin、总β-catenin的表达变化，从正反两方面进一步了解BCR-ABL扩增在体外激活Wnt/β-catenin信号转导通路的作用机理。⑶构建K562-NOD/SCID小鼠的CML模型，观察抑制剂处理组模型小鼠的疾病潜伏期、一般情况、生存期、外周血中WBC及白血病细胞的数量，流式细胞术观察外周血CD45+白血病细胞的百分率；石蜡切片染色观察白血病细胞在肝、脾、肺等组织的侵润情况；免疫荧光、流式细胞术检测模型鼠骨髓及外周血中β-catenin的表达及核浆分布；并取模型小鼠骨髓的单个核细胞构建二次移植模型，比较K562细胞的再次成瘤能力的差异，研究 BCR-ABL扩增在 CML小鼠中激活Wnt/β-catenin信号转导通路的作用机理。 结果：①在CML急变期病人中BCR-ABL和β-catenin的基因及蛋白水平都明显高于慢性期患者，慢粒急变期细胞株K562及KU812细胞中β-catenin的表达明显高于其他细胞株，尤其是在K562细胞中。与未转化的正常细胞株比较，转染了bcr/abl融合基因(P210)的转化细胞株(BaF3-P210、32D-P210)中β-catenin和磷酸化AKT(p-AKT)的表达也是增高的。②在慢粒急变期白血病细胞株K562细胞中，应用三种抑制剂分别抑制BCR-ABL/PI3K/AKT通路，可使细胞胞浆及胞核中的β-catenin的蛋白表达降低，减少GSK-3β的磷酸化，加快β-catenin的降解，减少β-catenin的入核，降低了下游癌基因c-myc，cyclinD1的mRNA及蛋白水平，并使 K562细胞克隆形成能力下降。而使用 IGF-1激活PI3K/AKT通路，可使p-GSK-3β表达增加， p-β-catenin减少，总β-catenin及c-myc增加。③应用三种抑制剂抑制BCR-ABL/PI3K/AKT通路，明显延缓了K562细胞在NOD/SCID小鼠体内的植入，延长了小鼠的发病时间及生存期。抑制剂处理组小鼠在体重减轻、外周血白细胞增高、肝脾肿大、脏器白血病细胞浸润、其它部位肿瘤发生等方面都较对照组有明显改善。并且小鼠的外周血白血病细胞、骨髓、脾肺组织中β-catenin的表达均下降。二次移植实验提示抑制BCR-ABL/PI3K/Akt的活性，可减弱白血病细胞的再次成瘤能力，减少CML二次移植模型小鼠外周血及骨髓中白血病细胞的浸润，使小鼠的生存期延长。 结论：从体内外两方面证明抑制BCR-ABL/PI3K/AKT通路，可减少GSK-3β的磷酸化，从而降低细胞中β-catenin的表达，使白血病细胞的自我更新能力下降、致病能力减弱，并可能因此延迟了白血病细胞向LSC的转化，延缓CML小鼠的疾病进展，减慢CML的急变。