论文部分内容阅读
研究目的利用小鼠变应性接触性皮炎(ACD)模型，从其病理变化，相关免疫细胞、细胞因子及其mRNA的表达等角度，探讨消风散对ACD的作用及其免疫学机制，为消风散在临床上的进一步应用提供实验依据，从中探讨中医认识疾病和机体功能的规律，促进中医皮肤理论的现代化。研究方法用二硝基氯苯(DNCB)皮肤涂抹法制备小鼠ACD模型，通过观察消风散对小鼠病变耳的厚度差、肿胀度、肿胀抑制百分率、免疫器官脾指数及胸腺指数的影响，对其抗ACD作用进行初步评价；应用HE染色病理检查及透射电镜观察消风散对ACD小鼠病变局部组织病理变化以及超微结构的影响，并综合分析消风散对ACD的疗效；应用血细胞分析仪测定了小鼠血液中白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞数及单核细胞数；应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定ACD模型小鼠血清中白细胞介素4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)及可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的含量，对消风散调节血液中Th1／Th2型细胞因子网络进行研究。同时，应用免疫组织化学的方法及逆转录／聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测病变组织局部白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素13(IL-13)、IFN-γmRNA及白细胞介素6(IL-6)mRNA的表达情况，观察消风散对局部病变组织中Th1／Th2型细胞因子网络平衡的影响。研究结果1．消风散可减轻ACD模型小鼠病变耳的厚度差和肿胀度ACD模型组小鼠病变的右耳和未病变左耳的厚度差增加，病变耳的肿胀度升高，与生理盐水组比较差异显著(P＜0.05)。消风散组小鼠耳的厚度差明显减少，鼠耳肿胀度明显减轻，与ACD模型组比较差异显著(P＜0.05)。2．消风散可降低ACD模型小鼠的脾指数及胸腺指数ACD模型组小鼠的脾指数、胸腺指数均明显升高，与生理盐水组比较有显著差异(P＜0.05)。消风散组与强的松组小鼠的脾指数及胸腺指数均明显下降，与ACD模型组比较差异显著(P＜0.05)。消风散组与强的松组相比较无明显统计学差异(P＞0.05)。3．消风散可减轻ACD模型小鼠病变局部组织病理及超微结构损伤的程度ACD模型组小鼠病变组织的病理切片显示表皮的棘层和基底层有明显的炎症细胞浸润，组织间隙水肿。用消风散干预后，其皮肤表皮损伤减轻，细胞间水肿明显减轻，真皮内炎性细胞浸润明显减少。在皮肤超微结构的研究中，ACD模型组小鼠病变皮肤中表皮角质细胞电子密度略增强，棘细胞与基底细胞均出现萎缩，间隙增宽；胞质内的细胞器呈空泡样改变，核内异染色质浓缩成团块状，线粒体嵴断裂，呈空泡样改变。消风散组小鼠病变皮肤各层组织结构规则，棘细胞萎缩较轻，细胞间隙增宽的程度也较模型组明显改善；虽然基细胞间隙增宽，细胞间连接消失，细胞核变大，但其程度较ACD模型组明显减轻；胞质内可见结构完整的线粒体和核糖体。4．消风散可降低ACD模型小鼠外周血中白细胞总数、中性粒细胞数及淋巴细胞数ACD模型组小鼠外周血中白细胞总数、中性粒细胞数及淋巴细胞数均明显高于生理盐水组，差异显著(P＜0.05)。消风散组及强的松组小鼠外周血液中的白细胞总数、中性粒细胞数及淋巴细胞数均下降，与ACD模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。消风散对单核细胞计数影响不大，与生理盐水组比较无显著性差异(P＞0.05)。5．消风散可上调ACD模型小鼠血清中IL-4的含量及下调IFN-γ、sIL-2R的含量消风散与强的松均可上调ACD模型小鼠血清中IL-4的水平，与ACD模型组比较有显著性差异(P＜0.05)；且二者均可下调血清中IFN-γ水平，与ACD模型组比较差异显著(P＜0.05)。消风散与强的松均可使其sIL-2R的水平下降，与ACD模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。消风散组与强的松组比较上述3指标均无明显差异(P＞0.05)。6．消风散可上调ACD模型小鼠病变皮肤组织中IL-10的含量及下调其IL-13的含量ACD模型组小鼠病变皮肤组织中IL-10的表达无明显增加，与生理盐水组比较无明显差异(P＞0.05)。消风散组、强的松组小鼠皮肤病变组织中IL-10的表达较ACD模型组明显升高，与之比较有显著性差异(P＜0.05)。ACD模型组小鼠病变皮肤组织中IL-13的表达明显升高，与生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05)；而消风散组、强的松组小鼠皮肤病变组织中IL-13的表达较ACD模型组明显下降，与之比较均有显著性差异(P＜0.05)。7．消风散可下调ACD模型小鼠病变耳组织中IFN-γmRNA的表达，但对IL-6 mRNA的表达无明显影响ACD模型组小鼠耳组织细胞中IFN-γmRNA的表达较生理盐水组明显增多(P＜0.05)。消风散组及强的松组其IFN-γmRNA的表达下降，与ACD模型组比较差异显著(P＜0.05)。ACD模型组小鼠耳组织细胞中IL-6 mRNA的表达较生理盐水组明显升高，有显著性差异(P＜0.05)；但消风散组及强的松组IL-6 mRNA的表达与模型组比较差异不显著(P＞0.05)。8．ACD模型小鼠血清中IFN-γ与组织中IFN-γmRNA的相关分析ACD模型组小鼠病变耳组织中IFN-γmRNA的表达及血清中IFN-γ的含量均显著增加，消风散能降低其血液中IFN-γ的含量及病变组织中IFN-γmRNA的表达。血清中IFN-γ的含量与局部病变组织中IFN-γmRNA的表达具有一致性，其相关分析结果表明两者呈正相关，相关系数为0.754。研究结论1．消风散可有效地抑制小鼠的ACD。既可抑制其局部炎症反应，又能抑制ACD伴发的脾和胸腺的增大反应；减轻ACD模型小鼠病变局部组织病理及超微结构损伤的程度。2．消风散可降低ACD模型小鼠外周血中白细胞总数、中性粒细胞及淋巴细胞数。3．消风散可上调ACD模型小鼠血清中IL-4的含量及下调其IFN-γ、sIL-2R的含量；上调ACD模型小鼠病变皮肤组织中IL-10的含量及下调其IL-13的含量；下调ACD模型小鼠病变耳组织中IFN-γmRNA的表达，但对IL-6 mRNA的表达无明显影响。4．ACD模型小鼠血清中IFN-γ的含量与局部病变组织中IFN-γmRNA的表达呈正相关关系。5．消风散对Th1和Th2免疫平衡的调节，可能是其抑制小鼠ACD的机制之一。