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背景与目的:颅内动脉瘤是对人类生命健康构成严重威胁的一种急性脑血管疾病,目前关于颅内动脉瘤的发生机制尚未完全阐明。大量研究表明,血管内皮细胞损伤是形成颅内动脉瘤的始动环节。血管内皮细胞损伤其潜在的机制包括血流动力学应激、一氧化氮合酶活性降低、氧化应激、雌激素失衡和内皮细胞与内皮细胞的连接损伤等。然而,血流动力学如何引起血管内皮损伤的机制仍需进一步阐述。P120ctn在血管内皮连接中扮演重要角色。P120ctn的高度保守近膜结构域与VE-cadherin结合维持内皮细胞黏附连接的稳定性;P120ctn也是天然免疫反应的调控因子之一,与炎症因子NF-B激活相关。PKCα与血管性疾病关系密切,能够调控P120ctn表达及磷酸化。本课题旨在研究PKCα-P120ctn-NF-B信号通路是否参与流体剪切应力引起的血管内皮损伤。方法:我们自行设计了一种新型T型细胞流体力学装置,构建血管内皮细胞损伤模型。通过流体力学模拟软件计算T型流室腔内的剪切力和剪切力梯度,根据载玻片上不同的剪切力和剪切力梯度将载玻片分为三个区域:Ⅰ区:停滞区,为低至正常的流体剪切力;Ⅱ区:加速区,高流体剪切力及高剪切力梯度;Ⅲ区:为负到零的高流体剪切力及高剪切力梯度,然后将Ⅱ区人脐静脉内皮细胞作为研究对象。体外培养人脐静脉内皮细胞,分别运用RNAiPKCα重组慢病毒及P120ctnS879突变质粒转染内皮细胞,先后将上述内皮细胞种植于载玻片上置于T型流体力学装置中。加载500ml/min流量冲击载玻片上的内皮细胞0小时及6小时。运用倒置显微镜及Western Blot等技术检测血管内皮细胞密度、形态变化、PKCα、P120ctn、磷酸化P120ctnS879、VE-cadherin及NF-B等蛋白变化。结果:1、流体剪切力对内皮细胞形态及密度变化的影响:在高壁流体剪切力区(Ⅱ区),倒置显微镜观察到内皮细胞密度明显降低,内皮细胞间间隙增大及内皮细胞形态多样化伴沿流体长轴方向拉长;Ⅰ区内皮细胞密度及形态基本不变;Ⅲ区内皮细胞密度稍变多。2、流体剪切力对内皮细胞的PKCα、P120ctn、P-P120ctnS879、VE-cadherin及NF-B表达情况的影响:在流体剪切力作用下,内皮细胞中P-PKCα表达明显增多(P<0.05);P120ctn、VE-cadherin表达显著减少(P<0.01);P-P120ctnS879表达明显增多(P<0.05);NF-B表达显著增多(P<0.01)。3、PKCα对内皮细胞P120ctn、P-P120ctnS879、VE-cadherin及NF-B表达情况的影响:在流体剪切力作用下,在敲除PKCα的内皮细胞中,P120ctn、VE-cadherin表达未见明显改变(P>0.05);P-P120ctnS879表达几乎检测不到;NF-B表达显著减少(P<0.01)。4、P120ctn S879对内皮细胞NF-B表达情况的影响:在流体剪切力作用下,在P120ctnS879突变内皮细胞中,P-PKCα表达明显增多(P<0.05);P120ctn表达显著减少(P<0.01);VE-cadherin表达明显减少(P<0.05);NF-B表达未见明显改变(P>0.05),但是相对于正常内皮细胞NF-B表达显著降低(P<0.05)。结论:PKCα-P120ctn-NF-B信号通路参与了流体剪切力作用引起的血管内皮损伤,其可能机制如下:1、PKCα抑制P120ctn、VE-cadherin表达导致血管内皮之间黏附连接受损;2、PKCα磷酸化P120ctnS879促进NF-B表达参与炎症反应。