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HHK人工腱植入研究已有报道,基础与临床均有相应的文献发表,但至今为止未见关于人工腱植入后诱导自生腱形成机制的系统报道。本实验以兔为动物模型,将HHK人工腱植入离断的兔跟腱,采用组织学技术、化学测定和原位杂交法完成植入后形态学研究、胶原纤维的变化和某些关键性的生长因子的表达。 研究内容分为三部分: 一、植入后人工腱降解和自生腱形成形态学变化。取植入后第1、2天、第1周人工腱与兔自体腱吻合端及植入后第2、3、6、9周人工腱中段,采用常规石蜡切片、HE染色和电镜技术,证实人工腱能诱导与自体腱相似的自生腱。植入后1周内主要表现为无菌性炎症反应;植入后第1周由于腱外膜的启动作用,出现一膜状物粘附在人工腱上,此膜状物是纤维鞘的雏型,随后纤维鞘不断增厚,包裹人工腱,在此封闭的环境中完成人工腱的降解过程;植入后第2周纤维鞘已明显增厚,尚无血管出现,有包裹人发的迹象;植入后第3周,纤维鞘血管丰富,人发降解活动活跃;植入后第6周,纤维鞘继续增厚,可见大量被裂解、消化的人发碎块,人工腱区出现来自腱细胞的成束的胶原纤维;植入后第9周,纤维鞘变薄形成腱外膜,人工腱消失,仅存少量的色素由单核细胞清理,胶原纤维排列规则近似正常肌腱结构。人工腱植入物经过细胞粘附、肉芽组织包裹、细胞侵入、消化裂解,最后由巨噬细胞吞噬残余的色素颗粒,完成降解吸收过程。 二、胶原纤维的变化。取植入后第2、3、6、9周的人工健中段利用Van Geison(VG)特殊染色法显示胶原纤维、分光光度法检测羟脯氨酸以反映胶原蛋白的代谢状况。VG显色结果,植入后第2周,纤维鞘中的胶原纤维呈细丝状,断断续续,杂乱无章,为幼稚状;植入后第3周,纤维鞘中除上述状态的胶原纤维外,出现较成熟的、粗大的、围绕人工腱成层排列的胶原纤维;植入后第6周,纤维鞘中胶原纤维多成层排列,人工腱区大量显色的胶原纤维,平行于肌腱长轴;植入后第9周,镜下几乎全是显红色的胶原纤维,长轴方向与自体键一致,胶原纤维成束排列,纵切面可见波浪状皱折,近似正常肌臃结构。羟脯氨酸测定结果表明植人后第2、3、6、9周各组间胶原蛋白含量有明显差异;前三组蛋白含量逐渐升高,与正常肌健蛋白含量有差异;第9周较第6周低,且与正常肌健无明显差异。 三、bFGF、TGF 6。mRNA的表达。运用原位杂交技术,显示bFGF、TGF 6。mRNA在组织与细胞中的定位与表达。植入后第 2周时 Bfgf mRNA表现出强阳性反应,主要在健鞘中幼稚的结缔组织细胞中表达,TGF卜2 mRNA表达较弱;植人后第 3周 bFGFmRNA弱阳性,仅在少量的血细胞有反应,纤维鞘部位的成纤维细胞 TGF卜 mRNA强阳性反应;植人后第 6周结果与第 3周近似,植入后第9周与正常肌键两者均呈弱阳性反应或阴性反应。 研究结果提示在人工健降解、自生诞形成和重塑的整个过程中,健膜、成纤维细胞、炎性细胞等扮演重要的角色。它们或通过自身的分化,或分泌细胞因子如 bFGF、TGF i) 或行使吞噬、诱导功能,使得人工懈含量不断减少,胶原纤维量不断增加,胶原纤维逐渐成熟有序,最后形成自生健。