Twist1及Twist1-AS在骨肉瘤组织及细胞中的表达及相关性研究

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目的:Twist1是一类转录因子,Twist1-AS属于lncRNA,两者可通过互补配对形成双链RNA (dsRNA),这两者在多个肿瘤病理过程中起到了调控作用,然而在骨肉瘤发病过程中的作用尚不明确,本文主要通过测定Twist1及Twistl-AS分别在骨肉瘤细胞系,骨肉瘤组织,瘤旁组织及正常组织中的表达情况,试评估两者在骨肉瘤发病过程中的相关性并为后续研究其机制提供理论依据。方法:1.应用RT-PCR检测7名骨肉瘤患者标本(含骨肉瘤瘤体组织,瘤旁组织及正常切缘组织)中Twist1及Twistl-AS的表达情况,采用SPSS19.0对结果进行统计学分析,探讨两个基因在瘤体组织,瘤旁组织与正常组织之间的表达差异。2.应用RT-PCR检测骨肉瘤细胞系MG-63,U2-OS及人成骨细胞hFOB1.19中Twist1及Twist1-AS的表达情况,采用SPSS19.0对结果进行统计学分析,研究两者在骨肉瘤中的表达差异。结果:1.Twist1在7例骨肉瘤瘤体组织中表达量高于正常切缘组织(P<0.05),7例瘤旁组织(距离瘤体2cm的组织)中Twist1的表达水平与正常切缘组织的差异无统计学意义(P>0.05),7例瘤旁组织(距离瘤体2cm的组织)中Twist1的表达水平与肿瘤组织的差异无统计学意义(P>0.05)2.Twist1-AS在7例骨肉瘤瘤体组织中表达量高于正常切缘组织(P<0.05),7例瘤旁组织(距离瘤体2cm的组织)中Twist1-AS的表达水平与正常切缘组织的差异无统计学意义(P>0.05),7例瘤旁组织(距离瘤体2cm的组织)中Twist1-AS的表达水平与肿瘤组织的差异无统计学意义(P>0.05)。3.MG-63和U2-OS中Twist1的表达量与hFOB1.19的差异无明显统计学意义(P>0.05)。4.MG-63和U2-OS中Twist1-AS的表达量较hFOB1.19高(P<0.05)。5.使用随机引物进行Twist1-AS逆转录将导致RT-PCR无法得到Ct值。结论:1.本实验明确了Twist1/Twistl-AS这对基因在骨肉瘤组织中表达水平较正常组织有所升高,验证了本课题组前期研究基因芯片结果,并为后续探索其作用机制提供了理论依据和基因储备。2. Twistl-AS在肿瘤细胞中的表达量显著高于hFOB1.19。3.通过RT-PCR进行检测AS这类反义转录物时,必须进行特异性逆转录,如果使用随机引物或者不当特异引物反应后进入扩增,将无法得到Ct值。
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