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研究背景和目的肺癌是人类最常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率居所有恶性肿瘤首位。非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌的83%,其中肺腺癌是NSCLC最常见的亚型,其发病率逐年升高,是严重威胁生命的重要疾病之一。趋化因子受体9(Chemokine receptor 9,CCR9)是趋化因子CCL25(C-C chemokine ligand 25,CCL25)的唯一特异性受体,在多种实体肿瘤中检测到CCR9的表达增高,CCR9的高表达在肿瘤发生发展和转移中起着重要作用。许多的研究证实,肿瘤干细胞(Cancer stem cells,CSCs)是肿瘤转移和复发的根源,ALDH1A1(Aldehyde dehydrogena 1 family member A1)是乙醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)超家族中的一员,是CSCs的表达标记之一。肺腺癌组织中CCR9的表达明显增加,但CCR9对促进肺腺癌远处转移的作用和机制仍然未知。为了初步阐明其作用和潜在机制,我们研究了CCR9与ALDHhigh CSCs之间的相关性,以及CCR9/CCL25信号转导通路对肺腺癌CSCs迁移和侵袭的影响。研究方法1.用临床组织样本检测肺腺癌患者肿瘤组织中CCR9和ALDH1A1表达水平,研究它们与临床病理参数的相关性以及对肺腺癌患者生存预后的影响。收集广州市第一人民医院2007至2016年期间手术后经病理确诊的76例肺腺癌患者的病理石蜡切片,用免疫组织化学的方法检测肿瘤组织中CCR9和ALDH1A1的表达情况。根据免疫组化评分,将患者分成高表达组和低表达组,分别研究CCR9和ALDH1A1的表达水平与肺腺癌患者临床病理参数之间的关系,并研究它们与远处转移之间的相关性;Kaplan-Meier生存曲线分析CCR9和ALDH1A1对总生存期的影响,Cox比例风险回归模型分析患者生存预后的影响因素。2.肺腺癌ALDHhigh细胞(ALDHhigh CSCs)和ALDHlow细胞中CCR9的表达差异用ALDEFLUOR试剂盒和流式细胞技术分选出ALDHhigh细胞亚群和ALDHlow细胞亚群,通过流式细胞术检测ALDHhigh细胞和ALDHlow细胞中CCR9的表达情况,同时通过实时荧光定量实验检测ALDHhigh细胞和ALDHlow细胞中CCR9 m RNA的表达差异。3.CCR9/CCL25信号转导通路对肺腺癌CSCs迁移和侵袭的影响Transwell实验研究外源性CCL25以及CCR9拮抗剂对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。实验结果1.CCR9的表达在有远处转移和无远处转移的肺腺癌患者间存在差异,CCR9的表达与远处转移呈正相关,CCR9高表达的患者更可能发生远处转移。高表达CCR9的患者的总生存期较低表达CCR9的患者低。2.ALDH1A1的表达在有远处转移和无远处转移的肺腺癌患者间存在差异,ALDH1A1的表达与远处转移呈正相关,ALDH1A1高表达的患者更可能发生远处转移。高表达ALDH1A1的患者的总生存期较低表达ALDH1A1的患者低。3.单因素分析表明,CCR9表达、ALDH1A1表达、远处转移和TNM分期可以预测肺腺癌患者的总生存期。多因素分析显示ALDH1A1表达和远处转移是影响肺腺癌患者总生存期的独立危险因素。4.在相同的肿瘤微环境中,CCR9和ALDH1A1的表达呈正相关。与ALDHlow细胞相比,ALDHhigh细胞的CCR9表达增强。进一步的transwell分析表明,经过外源性CCL25刺激后,响应于CCL25迁移或侵袭的肺腺癌CSCs数量增多,CCR9拮抗剂抑制了CCL25诱导的CSCs迁移和侵袭。研究结论肺腺癌中CCR9和ALDH1A1高表达与远转移和不良预后密切相关;ALDH1A1高表达和远处转移是影响肺腺癌总生存期的独立危险因素。进一步的研究发现,CCR9和ALDH1A1在肺腺癌中的表达存在正相关,ALDHhigh细胞中CCR9的表达明显增高,CCR9/CCL25信号转导通路能明显促进肺腺癌CSCs的迁移和侵袭。通过该研究,揭示了肺腺癌远处转移和不良预后的新机制,也为CCR9/CCL25用作治疗肺腺癌的新靶标提供了证据。