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背景
结肠癌是一类常见的恶性肿瘤，其发病率在我国恶性肿瘤中居第4位。结肠癌的早期诊断对患者的预后至关重要，研究表明，早期结肠癌经手术治疗后，其5年生存率可高达97%。近年来，越来越多的证据显示肿瘤患者体内存在针对肿瘤相关抗原(Tumor-associated antigens, TAAs)成分的强烈体液免疫反应；这些TAAs诱导免疫系统产生相应的自身抗体，并且在癌症的无症状阶段(前几个月至几年之内)就能检测到针对自体肿瘤相关抗原的血清自身抗体。
目的
本项目通过前期小样本队列的ELISA预实验，发现针对TIF1γ的IgA与IgG抗体，以及针对p53、HRAS、NSG1的IgG抗体在早期结肠癌组的阳性率均明显高于结肠良性病变(CBL)组/健康对照(HC)组(P<0.01)，提示这5种自身抗体对结肠癌早期患者可能具有较好的诊断价值。在此前期研究基础上，本项目拟在大样本范围内验证5种自身抗体单独检测对结肠癌早期患者的诊断性能，并通过比较、分析，探讨自身抗体组合检测以及联合常规抗原类肿瘤标志物对结肠癌早期诊断的价值。
方法
1.构建酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法，检测小样本队列10种血清自身抗体标志物抗p53、ETHE1、CTAG1A、C1QTNF1、TEX264、CLDN2、NSG1、HRAS、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体对结肠癌早期诊断的价值。小样本队列包括40例早期结肠癌患者、40例晚期结肠癌患者、40例CBL患者与40例HC。
2.采用免疫印迹法(western blotting)验证抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体的ELISA检测结果。
3.采用ELISA法在大样本范围内【早期(0期、Ⅰ期、Ⅱ期)结肠癌患者157例、晚期(III、IV期)结肠癌患者144例；CBL患者130例、HC170例】研究抗p53、HRAS、CTAG1A、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体单独检测对结肠癌早期诊断的性能。
4.采用免疫组织化学技术检测p53、HRAS、NSG1和TIF1γ蛋白在早期结肠癌组织和配对癌旁组织中的表达情况。
5.比较、分析5种自身抗体不同组合检测方式对结肠癌早期诊断的性能，建立对早期结肠癌患者具理想诊断性能的自身抗体组合检测模式。
6.采用化学发光法检测相同研究对象血清中3种结肠癌常规抗原类肿瘤标志物CEA、CA19-9和CA724的水平，研究3种常规抗原类标志物检测对结肠癌早期诊断的性能。
7.比较、分析自身抗体组合与不同常规抗原类肿瘤标志物联合检测对结肠癌早期诊断性能的差异；在保证特异性的前提下，分析并建立自身抗体组合与常规抗原类肿瘤标志物联合检测的模式，以进一步提高对结肠癌早期诊断的性能。
结果
1.小样本队列ELISA检测结果显示10种血清自身抗体中，抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体在早期结肠癌组和晚期结肠癌组的水平及阳性率均明显高于CBL组或HC组(P<0.01)。10种血清自身抗体中，抗ETHE1、CTAG1A、C1QTNF1、TEX264及CLDN2-IgG抗体的水平与阳性率在早期结肠癌组、晚期结肠癌组、CBL组或HC组间的差异无统计学意义(P>0.05)。
2.抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体的westernblotting检测结果与ELISA的检测结果相一致。
3.抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体在早期结肠癌患者的水平和阳性率均明显高于CBL组/HC组(P<0.01)。
4.应用免疫组织化学技术检测p53、HRAS、NSG1和TIF1γ蛋白的表达情况，结果显示ELISA测定结果为阴性(-)的早期结肠癌患者的癌组织和配对癌旁组织中4种蛋白呈现弱阳性表达；ELISA测定结果为阳性(+)的早期结肠癌患者的癌组织中4种蛋白的强阳性表达率明显高于配对癌旁组织(P<0.01)。
5.抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA自身抗体组合检测的AUC最高，达0.737(95%CI 0.690-0.781)，敏感性47.3%，特异性91.6%。
6.CEA、CA19-9和CA724对早期结肠癌患者的水平和阳性率均明显高于CBL组/HC组(P<0.01)，其中CEA的AUC为0.673，敏感性19.1%；CA19-9的AUC为0.627，敏感性12.1%；CA724的AUC为0.622，敏感性10.8%。
7.3种自身抗体组合抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA抗体与2种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、CA724的联合检测可将对早期结肠癌患者的AUC提高至0.788。
结论
1.抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体对结肠癌具有较好的早期诊断性能，AUC均>0.600，其中以抗TIF1γ-IgA抗体的AUC最高达0.716，敏感性23.6%。其中3种自身抗体抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA组合检测对结肠癌具理想的早期诊断性能。
2.CEA、CA19-9和CA724对结肠癌的早期诊断具一定的价值，其中以CEA对结肠癌早期患者的AUC和阳性率最高；但单个指标检测对结肠癌早期患者的阳性率不高，早期诊断的价值有限。
3.建立3种自身抗体抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA组合与2种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、CA724的联合检测模式，可进一步提高对早期结肠癌患者的诊断性能。
结肠癌是一类常见的恶性肿瘤，其发病率在我国恶性肿瘤中居第4位。结肠癌的早期诊断对患者的预后至关重要，研究表明，早期结肠癌经手术治疗后，其5年生存率可高达97%。近年来，越来越多的证据显示肿瘤患者体内存在针对肿瘤相关抗原(Tumor-associated antigens, TAAs)成分的强烈体液免疫反应；这些TAAs诱导免疫系统产生相应的自身抗体，并且在癌症的无症状阶段(前几个月至几年之内)就能检测到针对自体肿瘤相关抗原的血清自身抗体。
目的
本项目通过前期小样本队列的ELISA预实验，发现针对TIF1γ的IgA与IgG抗体，以及针对p53、HRAS、NSG1的IgG抗体在早期结肠癌组的阳性率均明显高于结肠良性病变(CBL)组/健康对照(HC)组(P<0.01)，提示这5种自身抗体对结肠癌早期患者可能具有较好的诊断价值。在此前期研究基础上，本项目拟在大样本范围内验证5种自身抗体单独检测对结肠癌早期患者的诊断性能，并通过比较、分析，探讨自身抗体组合检测以及联合常规抗原类肿瘤标志物对结肠癌早期诊断的价值。
方法
1.构建酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法，检测小样本队列10种血清自身抗体标志物抗p53、ETHE1、CTAG1A、C1QTNF1、TEX264、CLDN2、NSG1、HRAS、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体对结肠癌早期诊断的价值。小样本队列包括40例早期结肠癌患者、40例晚期结肠癌患者、40例CBL患者与40例HC。
2.采用免疫印迹法(western blotting)验证抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体的ELISA检测结果。
3.采用ELISA法在大样本范围内【早期(0期、Ⅰ期、Ⅱ期)结肠癌患者157例、晚期(III、IV期)结肠癌患者144例；CBL患者130例、HC170例】研究抗p53、HRAS、CTAG1A、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体单独检测对结肠癌早期诊断的性能。
4.采用免疫组织化学技术检测p53、HRAS、NSG1和TIF1γ蛋白在早期结肠癌组织和配对癌旁组织中的表达情况。
5.比较、分析5种自身抗体不同组合检测方式对结肠癌早期诊断的性能，建立对早期结肠癌患者具理想诊断性能的自身抗体组合检测模式。
6.采用化学发光法检测相同研究对象血清中3种结肠癌常规抗原类肿瘤标志物CEA、CA19-9和CA724的水平，研究3种常规抗原类标志物检测对结肠癌早期诊断的性能。
7.比较、分析自身抗体组合与不同常规抗原类肿瘤标志物联合检测对结肠癌早期诊断性能的差异；在保证特异性的前提下，分析并建立自身抗体组合与常规抗原类肿瘤标志物联合检测的模式，以进一步提高对结肠癌早期诊断的性能。
结果
1.小样本队列ELISA检测结果显示10种血清自身抗体中，抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体在早期结肠癌组和晚期结肠癌组的水平及阳性率均明显高于CBL组或HC组(P<0.01)。10种血清自身抗体中，抗ETHE1、CTAG1A、C1QTNF1、TEX264及CLDN2-IgG抗体的水平与阳性率在早期结肠癌组、晚期结肠癌组、CBL组或HC组间的差异无统计学意义(P>0.05)。
2.抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体的westernblotting检测结果与ELISA的检测结果相一致。
3.抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体在早期结肠癌患者的水平和阳性率均明显高于CBL组/HC组(P<0.01)。
4.应用免疫组织化学技术检测p53、HRAS、NSG1和TIF1γ蛋白的表达情况，结果显示ELISA测定结果为阴性(-)的早期结肠癌患者的癌组织和配对癌旁组织中4种蛋白呈现弱阳性表达；ELISA测定结果为阳性(+)的早期结肠癌患者的癌组织中4种蛋白的强阳性表达率明显高于配对癌旁组织(P<0.01)。
5.抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA自身抗体组合检测的AUC最高，达0.737(95%CI 0.690-0.781)，敏感性47.3%，特异性91.6%。
6.CEA、CA19-9和CA724对早期结肠癌患者的水平和阳性率均明显高于CBL组/HC组(P<0.01)，其中CEA的AUC为0.673，敏感性19.1%；CA19-9的AUC为0.627，敏感性12.1%；CA724的AUC为0.622，敏感性10.8%。
7.3种自身抗体组合抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA抗体与2种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、CA724的联合检测可将对早期结肠癌患者的AUC提高至0.788。
结论
1.抗p53、HRAS、NSG1、TIF1γ-IgG和TIF1γ-IgA抗体对结肠癌具有较好的早期诊断性能，AUC均>0.600，其中以抗TIF1γ-IgA抗体的AUC最高达0.716，敏感性23.6%。其中3种自身抗体抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA组合检测对结肠癌具理想的早期诊断性能。
2.CEA、CA19-9和CA724对结肠癌的早期诊断具一定的价值，其中以CEA对结肠癌早期患者的AUC和阳性率最高；但单个指标检测对结肠癌早期患者的阳性率不高，早期诊断的价值有限。
3.建立3种自身抗体抗p53、HRAS-IgG+TIF1γ-IgA组合与2种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、CA724的联合检测模式，可进一步提高对早期结肠癌患者的诊断性能。