百日菊叶斑病菌对杀菌剂的敏感性及寄主抗病生理研究

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百日菊(Zinnia elegans Jacq.)是中国重要的绿化园林植物,百日菊叶斑病会严重影响到百日菊的观赏价值。本文针对采集于安徽省合肥市、池州市和浙江省德清县这三个地区百日菊叶斑病的病样,组织分离法分离病原菌,形态学观察,测定其致病性并经柯赫氏法则验证;研究其生物学特性和寄主防御酶活性、SA和JA植物激素水平及百日菊与病原菌互作过程中相关基因表达量的差异;有效药剂的筛选及致病菌对多种杀菌剂的敏感性。研究结果如下:1.病原菌的分离鉴定和致病性测定。采用组织分离法从百日菊叶斑病病样中共分离25株真菌,结合形态学观察、分子生物学鉴定和致病性测定可知,病原菌为炭疽菌(Colletorichum)且均具有致病性。其中,C.gloeosporioides 8株,分离比例为32%,致病性最强,为优势菌株;C.fructicola 6株占24%;C.conoide1株占4%;C.simmaense 7株占28%;以及C.aenigma 3株占12%。2.胶孢炭疽菌的生物学特性。胶孢炭疽菌生长的最佳温度为28-30℃,致死温度为53℃;最适p H=5.0;蔗糖为最佳碳源;在氮源利用上,其尿素、硫酸铵、蛋白胨、牛肉浸膏、氯化铵和硫酸铵中均能生长,尿素中生长最好;不同培养基上生长有所差异,PDA培养基最好,其次是松针培养基、燕麦培养基,玉米培养基和菊花培养基,生长最差的培养基为V8培养基。3.病原菌对百日菊的生理生化机制的研究。病原菌侵染百日菊后,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定结果表明,寄主防御酶活性均在48 h明显升高,具有明显的增强作用;炭疽菌侵染百日菊叶片后,诱导叶片内(水杨酸)SA和(茉莉酸)JA含量均上升,且水杨酸和茉莉酸在病叶片中含量明显高于健康叶片。植株中SA合成基因PAL和ICS1相对表达量显著上升,表明百日菊炭疽菌病原菌胁迫促进了SA的合成与积累,POD酶合成相关基因全部上调。这与上述的PAL和POD酶活性测定结论保持一致,对酶活水平具有正向调控功能。4.病原菌对杀菌剂敏感基线的建立。本实验根据室内毒力测定选取5种药剂,测定结果表明:戊唑醇、氟硅唑、咪鲜胺、苯甲·丙环唑以及多菌灵均抑制胶孢炭疽菌生长,防治效果最好的为咪鲜胺其EC50为0.0259μg/m L。同时测定3个不同地区分离的25株炭疽菌对戊唑醇、氟硅唑和多菌灵3种杀菌剂的敏感性,初步确定了百日菊炭疽病对其敏感基线,分别为1.113μg/m L,0.745μg/m L和0.211μg/m L,从敏感基线来看这三种药剂均处于较低水平,百日菊叶斑病均未出现抗药性。其结果为进一步研究百日菊对炭疽菌的抗性提供相关理论基础,以及为百日菊叶斑病的监测和防治提供理论依据。
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