猪尿基质对胶体金免疫层析法和时间分辨荧光微球免疫层析法的影响

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免疫层析法(Immunochromatographic assay,ICA)是一种快速、方便、低成本的现场检测方法,已被广泛应用于食品安全领域。然而,不同样本的基质效应对这个方法的影响是值得关注的一个问题。本研究建立了盐酸克伦特罗胶体金免疫层析定量检测法和时间分辨荧光微球免疫层析定量检测法,系统地比较了不同猪尿样本对两种方法的基质干扰现象。本研究中以盐酸克伦特罗为目标分析物,建立了盐酸克伦特罗胶体金免疫层析定量检测方法。基于最优的工艺条件,胶体金免疫层析方法的检测限(Limit of detection,LOD)是68 pg/mL,线性范围是802000 pg/mL,半数抑制率(Half-maximal inhibitory,IC50)是417 pg/mL。在此基础上,磷酸盐缓冲溶液(Phosphate-buffered saline,PBS)和猪尿样本中加入盐酸克伦特罗标准品至终浓度为800pg/mL,利用胶体金免疫层析检测方法进行检测,结果显示,PBS的检测值是772pg/mL,而不同的猪尿样本的检测值范围在3831263 pg/mL之间。同时,在PBS和猪尿样本检测结果进行标准曲线的拟合,结果表明,基质的存在会使本检测方法的灵敏度降低,检测的线性范围变窄。基于时间分辨荧光微球,通过时间分辨荧光读取仪记录试纸条上检测线(Test line,T line)和质控线(Control line,C line)的荧光信号强度,本研究建立了时间分辨荧光微球免疫层析检测方法。对时间分辨荧光微球标记抗体时溶液pH、标记抗体的浓度、检测线全抗原浓度和检测时间进行了优化。基于最优的工艺条件,时间分辨荧光微球免疫层析方法的LOD是16 pg/mL,线性范围是402000 pg/mL,IC50是308 pg/mL。在此基础上,PBS和猪尿样本中加入盐酸克伦特罗标准品至终浓度为800 pg/mL,利用时间分辨荧光微球免疫层析方法进行检测,结果显示,PBS的检测值是735 pg/mL,而不同的猪尿样本的检测值范围在214264 pg/mL之间。由此可见,猪尿基质对该方法的准确性产生较大的影响。同时,对PBS和猪尿样本检测结果进行标准曲线的拟合,结果表明,基质的存在会使本检测方法的灵敏度降低,检测的线性范围变窄。通过比较两种免疫层析方法检测猪尿中盐酸克伦特罗的数据,我们发现时间分辨荧光微球免疫层析法具有更好的灵敏度(16 pg/mL)、更短的检测时间(10min)和更少的抗体用量(7μg/mL)。胶体金免疫层析法检测猪尿样本时,具有更好的稳定性(6.7%<10.6%)和抗基质干扰能力。本研究较为系统地探究了猪尿基质对两种免疫层析检测方法的影响,为不同标记物的免疫层析检测方法的实际应用提供了参考依据。
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