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蒙古黄芪(Astragalus membranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus)为豆科(Leguminosae)黄芪属植物,是中国传统重要的补益药之一。具有益气升阳、固表止汗、利水消肿、托毒生肌的功效。 本研究主要利用色谱的方法,结合细胞生物学活性分析,对其化学成分进行跟踪分离,采用光谱技术(红外,紫外、核磁共振波谱和质谱技术)对得到的10个单体化合物进行结构解析和鉴定,分别鉴定为芒柄花素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、9,10-二甲氧基紫檀烷3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、腺苷、肌醇甲苷、胡萝卜苷、β-谷甾醇和蔗糖,其中腺苷和肌醇甲苷为首次从该植物中分离得到。 选用神经细胞的模式细胞株PC12(rat pheochromocytoma cell line)细胞作为实验对象,利用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(xanthine/xanthine oxidase,XA/XO)对细胞进行损伤,造成直接的氧化损伤模型。利用MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenylterazolium bromide)法分别检测了五种黄芪异黄酮对损伤的PC12细胞的保护效应;采用LDH(lactate dehydrogenase)法和荧光染色法,检测了五种异黄酮对细胞膜的影响;同时检测了芒柄花素、毛蕊异黄酮及其苷对细胞内抗氧化体物GSH(glutathione)和抗氧化酶SOD(superoxide dismutase)、GSH-Px(glutathioneperoxidase)等的影响。结果表明0.1 μg/ml毛蕊异黄酮和0.05 μg/ml芒柄花素对损伤细胞具有明显的保护活性,能通过提高细胞内源性抗氧化物含量,降低膜的流动性,稳定膜结构,来提高细胞的抗氧化能力,减轻细胞的脂质过氧化程度,保护细胞免受损伤。 利用DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)法和黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系检测了五种黄芪异黄酮在体外的直接抗氧化活性。毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和芒柄花素对DPPH有机自由基的清除活性依次减弱,活性的大小与结构中羟基的位置和数目密切相关,由于半数有效剂量均高于100μg/ml,所以不是高效的有机自由基清除剂;在XA/XO体系中,五种异黄酮不具有清除超氧自由基的能力。同时,毛蕊