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目的：探讨培美曲塞与厄洛替尼单药、联合及序贯应用对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法：培美曲塞和厄洛替尼单药、联合及序贯作用A549细胞72小时后,采用MTT法检测A549细胞的增殖情况并计算联合指数,在倒置相差纤维镜下观察A549细胞形态变化,采用Hoechst33258染色法检测A549细胞的凋亡形态变化,采用流式细胞术检测A549细胞的凋亡率和周期分布,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测A549细胞磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(phospho-extracellular regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2)、磷酸化-AKT(phospho-AKT,p-AKT)和磷酸化表皮生长因子受体(phospho-epidermal growth factor receptor,p-EGFR)的表达。结果：1、培美曲塞和厄洛替尼抑制A549细胞的增殖厄洛替尼和培美曲塞作用于A549细胞72小时的半数抑制浓度分别为(11.89±0.73)μmol/L和(508.62±17.36)nmol/L。厄洛替尼和培美曲塞联合作用组的联合指数为1.14±0.07,培美曲塞序贯厄洛替尼作用组的联合指数为0.36±0.02,厄洛替尼序贯培美曲塞作用组的联合指数为1.95±0.18。培美曲塞序贯厄洛替尼对抑制A549细胞的增殖具有协同作用,厄洛替尼联合培美曲塞及厄洛替尼序贯培美曲塞对抑制A549细胞的增殖具有拮抗作用。2、培美曲塞和厄洛替尼作用后A549细胞的形态发生变化对照组A549细胞呈梭形,单层贴壁生长,细胞间隙清晰,生长旺盛；厄洛替尼作用组、厄洛替尼联合培美曲塞作用组和厄洛替尼序贯培美曲塞作用组A549细胞的体积都缩小,可见少量悬浮的死细胞。培美曲塞作用组和培美曲塞序贯厄洛替尼作用组A549细胞的体积都增大,形态不规则,培美曲塞作用组可见部分细胞碎片及悬浮的死细胞,培美曲塞序贯厄洛替尼作用组可见大量的细胞碎片和悬浮的死细胞。3、培美曲塞和厄洛替尼作用后A549细胞的凋亡形态变化对照组A549细胞的细胞核完整,呈均匀分散状；各加药组A549细胞都发生了部分细胞核染色亮度增强、染色质凝集、核固缩等变化,其中培美曲塞序贯厄洛替尼作用组A549细胞的凋亡最明显。4、培美曲塞和厄洛替尼作用后A549细胞的细胞周期分布厄洛替尼作用组、厄洛替尼联合培美曲塞作用组和厄洛替尼序贯培美曲塞作用组主要阻滞A549细胞于G1期,培美曲塞作用组和培美曲塞序贯厄洛替尼作用组主要阻滞A549细胞于S期。5、培美曲塞和厄洛替尼作用后A549细胞的凋亡培美曲塞和厄洛替尼均能诱导A549细胞凋亡,且培美曲塞序贯厄洛替尼可使A549细胞的凋亡率显著增加。6、培美曲塞和厄洛替尼作用后A549细胞中p-ERK1/2、p-AKT、p-EGFR的表达培美曲塞能够上调A549细胞p-ERKl/2、p-AKT、p-EGFR的表达水平,厄洛替尼能够下调A549细胞p-AKT的表达水平,培美曲塞序贯厄洛替尼可显著降低A549细胞p-AKT和p-EGFR的表达水平。结论：培美曲塞序贯厄洛替尼对A549细胞的增殖具有协同作用,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)-AKT通路的表达有关。