【摘 要】
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p53基因与肿瘤的发生和发展密切相关,是肿瘤基因治疗的首选抑癌基因;其功能相关基因p21基因的充分表达可以显著抑制肿瘤细胞的恶性增殖,将两者联合应用于基因治疗,具有较好的
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p53基因与肿瘤的发生和发展密切相关,是肿瘤基因治疗的首选抑癌基因;其功能相关基因p21基因的充分表达可以显著抑制肿瘤细胞的恶性增殖,将两者联合应用于基因治疗,具有较好的前景.该课题从这一角度出发,选择p53基因和p21基因作为治疗基因考察了抑癌基因联合治疗的效果.利用分子克隆技术得到含有p53基因、p21基因以及同时含有p53p21基因的DNA片段,含p53基因和p53p21基因的DNA片段与来源于pIND/GS-12B的中间载体pIND/GS-1连接,构建得到p53基因表达系统pCp53-Neo和双基因表达系统pCp53p21-Neo.含p21基因的DNA片段与来源于pIND/GS-12B的中间载体pIND/GS-2连接,得到p21基因表达系统pCp21-Neo.利用磷酸钙—DNA共沉淀法将重组基因表达系统pCp53-Neo、pCp21-Neo和pCp53p21-Neo引入肝癌细胞SMMC-7721,通过直接镜检,四唑盐(MTT)实验,DNA ladder实验,考察基因转染后肝癌细胞生长情况.研究发现p53基因和p21基因单独应用以及联合作用对肿瘤细胞有抑制作用,双基因联合应用的抑制率好于单基因应用组,并且作用的时效长于单基因应用组,DNA ladder实验显示双基因联合应用诱发了细胞凋亡.
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