肝癌在全球所有肿瘤致死原因居于第四位,其特点是疾病发生的诱因复杂,不易发现,恶性程度及死亡率高,从而严重威胁人类的生存质量。大量研究表明,糖代谢关键酶果糖1,6-二磷酸醛缩酶B（ALDOB）在肝癌发生发展过程中出现表达量明显下调,其低表达与肝癌预后不良密切相关,其过表达会抑制肝癌生长,使肝癌病人有更长存活期。但目前尚未发现ALDOB特定的调控剂。本论文采用中药网络药理学方法利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）对中药学数据库中对常见治疗肝癌的中药材活性成分进行筛选获得可以结合且对ALDOB有激活作用的活性成分,并对其进行结构优化,以期获得以ALDOB为靶点的抗肝癌治疗药物,为阐明抗肿瘤中药药效机制提供新的研究数据。方法:1.采用网络药理学方法从治疗肝癌的中药中筛选出调控ALDOB的活性成分,计算机分子对接及Western blot测定丹皮酚对ALDOB的调控作用,计算机辅助药物设计评价及筛选与ALDOB结合的丹皮酚结构类似物,微量热泳动技术（MST）测定丹皮酚及其结构类似物与ALDOB的亲和力。2.MTT法测定丹皮酚及其结构类似物对肝癌细胞增殖能力的影响,划痕和Transwell法测定丹皮酚及其结构类似物对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响,流式细胞术评价丹皮酚及其结构类似物对肝癌细胞周期和凋亡影响。3.建立裸鼠皮下移植瘤模型,测定丹皮酚及其结构类似物对裸鼠皮下瘤的抑瘤率及相关生化指标,评价丹皮酚及其结构类似物体内抗肝癌活性。4.通过PCR测定丹皮酚及其结构类似物对ALDOB转录水平的影响,高效液相色谱（HPLC）法测定丹皮酚及其结构类似物对肝癌细胞内丙酮醛（MG）生成的影响,慢病毒转染构建ALDOB RNA干扰及ALDOB过表达的肝癌细胞稳转株,转录组测序分析ALDOB对肝癌的调控通路,Western blot测定丹皮酚及其结构类似物对ALDOB及周期关键分子的表达影响。结果:1.具有对ALODB调控作用的丹皮酚及其结构类似物的筛选:发现牡丹皮中活性成分丹皮酚可结合ALDOB蛋白并上调肝癌细胞中ALDOB蛋白的表达;计算机辅助药物设计评价丹皮酚对ALDOB结合能力,评分为4.67分,进一步设计并筛选出5种与ALDOB结合能力更强的丹皮酚的结构类似物,五种结构类似物CM1,CM2,CM3,CM4,CM5评分依次为8.86、8.10、7.94、7.10、6.64分;MST结果显示,丹皮酚（CM6）,CM1,CM4可与ALDOB结合,其中CM4与ALDOB的亲和力最强,KD值为36.7μM。2.丹皮酚及其结构类似物体外抗肝癌活性评价:MTT结果显示丹皮酚及CM4显著抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,且呈剂量和时间依赖性,24 h最大抑制率分别为97.91±0.97%和76.60±0.22%,半数抑制浓度(IC50)值分别为3.93 m M和39.04μM;划痕和Transwell实验结果显示丹皮酚及CM4对肝癌细胞迁移和侵袭能力无显著影响;流式结果显示丹皮酚及CM4对肝癌细胞周期有显著影响,使细胞阻滞在S期,但对肝癌细胞凋亡没有明显影响。3.丹皮酚及CM4体内抗肝癌活性评价:100 mg/kg的丹皮酚组对裸鼠皮下瘤抑制率为48.87%;CM4呈现了显著的剂量依赖性抗肝癌作用,50 mg/kg和100 mg/kg的CM4给药组对裸鼠皮下瘤抑制率分别为42.85%和76.69%。4.丹皮酚及其结构类似物以ALDOB为靶点的抗肝癌机制研究:PCR及Western blot结果显示丹皮酚及其结构类似物CM4可上调肝癌细胞中ALDOB的m RNA及蛋白表达;丹皮酚及CM4可以促进不同肝癌细胞中MG的产生;测序结果表明ALDOB上调后会导致肝癌细胞周期S期相关基因CCNA2,CDK2等的异常表达,Western blot结果显示丹皮酚及其结构类似物CM4可通过ALDOB,使调控细胞周期S期关键的蛋白CCNA2和CDK2下调,进而调控肝癌细胞周期。综上所述,中药活性成分丹皮酚及其结构类似物CM4可与ALDOB直接结合产生显著的调控作用,结构类似物CM4的亲和力更强;丹皮酚及其结构类似物CM4具有显著的体内、外抗肝癌活性,其中CM4相对丹皮酚显示更好的抗肝癌活性;二者通过调控ALDOB促进肝癌细胞中MG的产生,使调控细胞周期S期关键蛋白CCNA2和CDK2蛋白下调,进而影响肝癌细胞周期。