PRRSV感染对猪骨髓NEU1及LAMP-1基因表达影响初探

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[目的1验证基于高通量测序技术建立的PRRSV感染骨髓组织数字化基因表达谱;应用生物信息学分析方法从数字化基因表达谱中筛选差异表达基因,并对所筛选的NEU1和LAMP-1基因表达情况进行研究,初步探索其在PRRSV感染后病毒与宿主相互作用中的作用,为更好地理解PRRSV感染的致病机理提供在溶酶体通路上的依据。[方法]从测序质量、测序饱和度、实验重复性和clean tag拷贝数统计分布四个方面对建立的PRRSV感染骨髓组织的数字化基因表达谱测序数据进行验证;对筛选出的NEU1和LAMP-1,采用荧光定量PCR和Western blot检测感染和非感染状态下所筛选基因表达水平的变化。[结果]PRRSV感染骨髓组织的数字化基因表达谱测序数据经验证可靠,能够为后续生物信息学分析及差异基因筛选提供有效基因素材;筛选得到感兴趣差异表达基因NEU1和LAMP-1,两者在数字化基因表达谱中均显著下调;荧光定量PCR结果显示NEU1基因mRNA水平均显著下调(p<0.05),LAMP-1基因mRNA水平下调趋势极显著(p<0.01):Western blot检测显示NEU1在蛋白水平的表达也显著下调(p<0.01)。[结论]NEU1和LAMP-1编码的蛋白均与溶酶体正常参与和发挥胞吐、吞噬、自噬、免疫等细胞功能紧密相关,同时LAMP-1作为NEU1的自然底物,其功能可以被NEU1的去唾液酸化作用所调节。这两个基因的下调表达可能在PRRSV的复制和释放过程中扮演了重要角色,但其具体的作用和机制有待进一步的研究。
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