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目的:1.建立动物药材商品的高效毛细管电泳(HPCE)指纹图谱测定方法。2.应用高效毛细管电泳(HPCE)指纹图谱,建立动物药材商品的品质评价模式。材料与方法:1.材料:10批不同地区地龙、土鳖虫(地鳖)、僵蚕、蜈蚣、蛤蚧、蕲蛇、乌梢蛇药材商品,地鳖和冀地鳖对照药材。2.方法2.1样品的处理:各待测样品均以水或稀醇为提取溶剂,超声提取。2.2仪器与试剂:美国Agilent 3D毛细管电泳仪,DAD检测器,Agilent化学工作站。AS5150A超声波清洗器;TDL-5-A离心机;AR2140电子分析天平。所用试剂均为市售分析纯,水为三级水;所用试剂均通过0.45μm微孔滤膜滤过。2.3电泳条件:毛细管内径分别为50、75μm,有效长度40~65cm;缓冲体系为硼砂-硼酸、硼砂;pH值在8~10之间;电压在12~25KV之间;柱温为25℃;进样方式为压力进样;检测器为紫外DAD检测器。2.4指纹图谱建立:将各样品HPCE测试谱图,导入中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件,分别拟合出各药材指纹图谱的对照指纹图谱R,然后计算各样品与其对照指纹图谱R的相似度。结果:1.以30mmol/L硼砂为缓冲溶液,pH 9.45,分离电压15kV,柱温25℃,检测波长250nm,测定地龙药材商品HPCE指纹图谱,得到8个共有峰,保留时间分别为3.985、4.804、5.259、6.255、6.641、6.793、7.537、7.967,各样品相对于对照图谱的相似度分别为0.846、0.912、0.719、0.959、0.859、0.932、0.874、0.948、0.949、0.940、0.849、0.853、0.899、0.868、0.928、0.966、0.821、0.968、0.868、0.791、0.825。2.以20mmol/L硼砂为缓冲溶液,pH 9.44,分离电压13kV,柱温25℃,检测波长265nm,测定土鳖虫药材商品HPCE指纹图谱,得到6个共有峰,保留时间分别为4.336、4.76、5.293、6.189、8.107、8.191,各样品相对于对照药材图谱的相似度分别为0.962、0.966、0.997、0.987、0.963、0.950、0.958、0.975、0.982、0.970。3.以30mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸为缓冲溶液,pH 8.6,分离电压18KV,柱温25℃,检测波长245nm,测定僵蚕药材商品HPCE指纹图谱,得到8个共有峰,保留时间分别为6.663、7.152、7.305、7.51、8.054、10.925、12.751、13.254,各样品相对于对照图谱的相似度分别为0.997、0.992、0.996、0.973、0.992、0.998、0.996、0.994、0.959、0.982。4.以40mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸为缓冲溶液,pH 8.9,分离电压20KV,柱温25℃,检测波长256nm,测定蜈蚣药材商品HPCE指纹图谱,得到7个共有峰,保留时间分别为6.014、7.515、8.93、10.158、12.232、12.458、14.808,各样品相对于对照图谱的相似度分别为0.948、0.981、0.875、0.957、0.883、0.949、0.859、0.956、0.967、0.849。5.以10mmol/L硼砂-1%乙腈为缓冲溶液,pH 9.18,分离电压20kV,柱温25℃,检测波长245nm,测定蛤蚧药材商品HPCE指纹图谱,得到7个共有峰,保留时间分别为4.865、6.004、6.348、7.064、8.386、8.692、8.846,各样品相对于对照图谱的相似度分别为0.974、0.987、0.967、0.963、0.976、0.990、0.910、0.961、0.979、0.526。6.以20mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸为缓冲溶液,pH 8.4,分离电压19kV,柱温25℃,检测波长245nm,测定蕲蛇药材商品HPCE指纹图谱,得到7个共有峰,保留时间分别为5.908、6.31、6.461、6.758、9.063、10.331、11.174,各样品相对于对照图谱的相似度分别为0.978、0.914、0.978、0.967、0.992、0.982、0.986、0.988、0.985、0.974。7.以80mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸为缓冲溶液,pH 8.8,分离电压18KV,柱温25℃,检测波长230nm,测定乌梢蛇药材商品HPCE指纹图谱,得到7个共有峰,保留时间分别为7.806、8.339、8.872、9.092、9.228、10.799、17.803,各样品相对于对照图谱的相似度分别为0.961、0.865、0.891、0.987、0.927、0.942、0.986、0.923、0.914、0.982。结论:1.在本实验所建立的七种动物药材商品的指纹图谱中,土鳖虫、僵蚕、蕲蛇各样品与其对应的对照药材或拟合的对照图谱比较,得到的相似度均在0.9以上,因此,可以认为目前市场上土鳖虫、僵蚕、蕲蛇药材商品的品种具有一致性;蜈蚣、蛤蚧、乌梢蛇药材各样品与其对应拟合的对照图谱比较,个别样品相似度小于0.9,但除蛤蚧(0.526)外,其他样品的相似度都接近0.9,表明蜈蚣、乌梢蛇药材商品的品种基本一致;在21份地龙药材商品中,10份为广地龙样品,11份为沪地龙样品,其中,广地龙除1#、3#样品外,其余样品相似度均大于0.9,表明广地龙样品间的相似性基本一致,而沪地龙样品中仅4份样品在0.9以上,4份样品的相似度接近0.9,另3份样品小于0.9,表明沪地龙品种来源比较复杂,与实际情况符合;但是否说明广地龙质量优于沪地龙,有待进一步研究。2.本研究发现,每种动物药材商品的指纹图谱其相似度小于0.9的样品,主要表现为各共有峰相对峰面积的差异(如蛤蚧10#样品的相似度为0.526,其相对峰面积显著高于整体平均水平),而相对保留时间与同品种其他样品比较基本一致。因此,高效毛细管电泳法不仅可作为动物药材品种鉴别的方法,也可对动物药材进行质量评价。3.从七种动物药材商品的HPCE指纹图谱分析结果可见,动物药中的主成分多为蛋白质、核苷等带电物质,而高效毛细管电泳(HPCE)正是分析该类成分的有效方法,故高效毛细管电泳法可作为动物药材指纹图谱的分析方法。