植物蜡质对棉铃虫产卵的引诱作用及机制研究

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植物蜡质是覆盖在植物各类器官角质层中的长链烷烃类、脂肪酸类、醇类化合物,在植物、植食性昆虫及天敌的多级营养关系中发挥着重要的作用,影响昆虫的取食、产卵等行为。嗅觉是昆虫的重要感觉模式,昆虫借助灵敏的嗅觉来识别复杂环境中的气味信息,从而完成寄主定位、配偶定位、产卵位点选择、天敌防御等重要的生命活动。对于怀卵雌蛾来说,选择适宜的产卵场所是完成其生活史及繁衍后代的重要环节。本文首先对棉花叶片的长链烷烃类化合物进行鉴定,再通过气相色谱-触角电位联用仪(gas chromatography-electroantennographic detection,GC-EAD)技术筛选出能够引起棉铃虫成虫触角电位反应的活性蜡质组分,并进一步通过产卵行为试验证明这些蜡质化合物对怀卵棉铃虫雌蛾的产卵刺激作用,最后通过爪蟾卵母细胞表达结合双电极电压钳技术研究了两个棉铃虫特殊气味受体(odorant receptor,OR)的功能,明确棉花蜡质引诱雌蛾产卵的机制。主要结果如下:1.棉花叶片化合物的鉴定鉴于棉铃虫雌蛾偏好在寄主植物叶片部位产卵,而植物蜡质会影响昆虫的产卵选择,我们对棉铃虫寄主植物棉花的叶片蜡质化合物进行了收集和鉴定。采用动态针捕集技术对棉花叶片挥发物进行采集,再利用气相色谱-质谱联用(gas chromatography–mass spectrometry,GC-MS)技术分析出21种碳链长度在6-14之间的烷类、酯类、醛类、芳香族化合物。进一步采用浸泡法对棉花叶片的浸提物进行了萃取,GC-MS共鉴定到20种碳链长度在7-32之间化合物,其中15种为长链烷烃类化合物。2.活性蜡质化合物筛选及对棉铃虫雌蛾产卵行为的影响GC-EAD结果表明,棉花叶片中的7种烷烃类化合物,即n-C19、n-C20、n-C25、n-C26、n-C27、n-C28和n-C29,均能引起怀卵棉铃虫雌虫触角的EAD响应。产卵选择行为学实验发现这7种烷烃化合物的混合物对怀卵雌蛾有显著吸引,并触发产卵行为。我们进一步检测了单个蜡质组分对棉铃虫产卵行为的影响,发现其中3种蜡质组分n-C25、n-C27及n-C29均能显著吸引雌蛾产卵。3.棉铃虫气味受体HarmOR32和HarmOR48的功能研究前期研究发现棉铃虫气味受体(OR)进化树中存在一个特殊分支,这个分支中的4个OR对短链寄主植物挥发物均无反应,但其中的一个OR(HarmOR48)却对对2-十五烷酮有反应,因此推测这一分支中的OR可能感受长链烷烃化合物。采用爪蟾卵母细胞结合双电极电压钳技术对其中两个OR(HarmOR32和HarmOR48)进行体外功能研究,测试它们对43种长链烷烃类、醇类、醛类化合物的电生理反应。结果表明,HarmOR32能被多种性信息素成分激活,其对Z11-16:Ac的反应最大。除2-十五烷酮外,HarmOR48对Z9-16:OH、Z11-16:OH、Z9-14:OH和14:OH四种长链醇类化合物有反应。这两个OR对检测的植物蜡质化合物均无反应,说明棉铃虫存在其他OR参与感受植物蜡质化合物。
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