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严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)又称为传染性非典型肺炎,是一种新出现的烈性传染病。世界卫生组织(WHO)已确认该病的病原体为一种新的冠状病毒,命名为SARS冠状病毒(SARS-CoV)。SARS疫病全球暴发给国际社会造成了极大的恐慌,给世界各国的卫生事业以及经济发展带来了严重后果。但是SARS在临床上鉴别诊断比较困难,因此建立安全、特异、敏感的SARS-CoV抗原检测方法对SARS的早期诊断、预防和治疗具有重要意义。 本研究旨在制备抗基因工程表达的纤突蛋白(S)、核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb),初步建立早期检测SARS-CoV抗原的双抗体夹心ELISA方法。我们以基因工程表达的S、N蛋白为免疫原,采用常规杂交瘤技术分别制备分泌抗S、N蛋白的mAb杂交瘤细胞株;对其进行鉴定,包括细胞克隆株稳定性和染色体分析,检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb效价、免疫球蛋白(Ig)分型,特异性分析,中和试验,以及相关表位分析。以抗S蛋白、N蛋白抗体分别建立双抗体夹心ELISA法检测SARS-CoV抗原,对180份健康人血清、临床诊断为SARS的12份抗体阴性血清和12份抗体阳性血清进行检测。结果如下:成功制备出了3株分泌抗S蛋白mAb(B8G2,B10F6,C10G10)和2株分泌抗N蛋白mAb(F2G6G3,G5H12G12)的杂交瘤细胞株;杂交瘤细胞染色体计数接近两种亲本细胞染色体数目的总和;细胞培养上清和小鼠诱生腹水中mAb效价高;3株抗S蛋白mAb均为IgG1(κ),而抗N蛋白mAb G5H12G12为IgG2a(κ)、F2G6G3为IgG1(κ);单抗特