目的炎症性肠病是慢性肠道疾病的一种,目前仅指溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）。右旋糖酐硫酸钠盐（Dextran sodium sulfate,DSS）是诱导实验性小鼠UC的常用药物,在饮用水中给药会导致小鼠急性结肠炎。白细胞介素-36受体拮抗剂（Interleukin 36 receptor antagonist,IL-36Ra）是一种新的抗炎细胞因子,但IL-36Ra对DSS诱导的小鼠结肠炎的影响尚无报道。我们研究IL-36Ra在DSS诱导的小鼠UC中的作用及机制,为IL-36Ra的临床应用提供实验基础。方法1.建立DSS诱导的实验性小鼠UC模型。腹腔注射重组IL-36Ra蛋白。处死小鼠后收集血清和组织样本。实时定量聚合酶链反应检测结肠中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-1β、IL-6、IL-10、Foxp3+的m RNA表达;酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的蛋白表达。苏木精-伊红染色法分析结肠组织病理学变化;免疫组化染色分析结肠组织巨噬细胞的数量变化。蛋白质免疫印迹（Western blot）检测核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）通路中NF-κBp65和核因子κ核抑制蛋白α（Inhibitor kappa B alpha,IκBα）蛋白的表达,及丝裂原激活蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（Extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p-JNK、p38、p-p38蛋白的表达。2.体外培养小鼠RAW264.7细胞。细胞培养基中添加脂多糖（LPS）和IL-36Ra蛋白与RAW264.7细胞共培养。细胞的活性通过MTT法测定;实时定量聚合酶链反应检测细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的m RNA表达;ELISA测定培养基上清中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的含量。Western blot检测NF-κB信号通路中的NF-κBp65、p-NF-κBp65、IκBα和p-IκBα及MAPK信号通路中ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、p38、p-p38蛋白的表达。结果1.成功构建DSS诱导的小鼠UC模型。组织病理学研究发现IL-36Ra能抑制溃疡性肠炎模型小鼠的结肠中炎性细胞浸润,减轻结肠的水肿充血程度,减轻小鼠体重的下降,降低疾病活动指数评分,显著抑制结肠组织的髓过氧化物酶活性。q RT-PCR发现IL-36Ra能下调炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。Western blot发现IL-36Ra抑制p-NF-κBp65和p-IκBα蛋白的表达,降低MAPK信号通路中p-ERK1/2、p-p38蛋白表达。2.小鼠RAW264.7细胞经过重组IL-36Ra蛋白和LPS的共培养。结果显示,LPS不会影响RAW264.7细胞的活性。经重组IL-36Ra蛋白预培养后,IL-6、IL-1β和TNF-α的m RNA表达明显降低。同时IL-36Ra可抑制NF-κB、MAPK信号通路相关蛋白的表达。结论研究结果表明,IL-36Ra可以通过抑制NF-κB信号通路中p-NF-κBp65,p-IκBα蛋白和MAPK信号通路中p-p38、p-ERK1/2蛋白的活化,下调炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,发挥抑制实验性UC的作用。此外,在LPS激活的RAW264.7巨噬细胞中使用重组IL-36Ra蛋白孵育可使炎症细胞因子的表达降低。说明IL-36Ra是一种抗炎细胞因子,为溃疡性结肠炎的治疗提供了新思路。