PPV/HN-2011毒株分子生物学特性研究及利用杆状病毒表达其VP2蛋白

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猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起猪群繁殖障碍的重要病原之一,母猪感染PPV的典型临床繁殖障碍特征是返情、流产、木乃伊胎和死胎,此外,PPV可以增强猪圆环病毒2型的临床症状,也是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(porcine postweaing mulisystemic wastingsyndome,PMWS)的病原之一。本论文针对PPV HN-2011毒株的NS1与VP2基因进行系统进化分析,利用杆状病毒表达系统表达PPV的VP2蛋白,并进行VP2蛋白的抗原特征分析,其目的是为了了解PPVHN-2011毒株的遗传背景信息,并比较PPV传统灭活疫苗与重组VP2亚单位疫苗的免疫效果。试验一:猪细小病毒HN-2011全基因组测序及生物信息学分析通过设计涵盖PPV基因组的5对引物,分段克隆PPV的基因片段,将PCR鉴定为阳性的重组质粒送大连宝生物工程公司测序。结果表明HN-2011株序列长为4773nt,其编码区均不存在碱基的插入与缺失,ORF2编码VP1和VP2下游存在一个127-bp重复。将中国河南PPV HN-2011毒株的基因组序列与GenBank收录的的PPV的NS1和VP2基因序列进行了分析表明,PPV分离株可以划分为4组,中国的PPV主要集中在A和B两组,只有一个JY株存在于C组;PPV基因组的压力选择分析显示出,NS1和VP2基因分别受到负向和正向的选择;PPV VP2蛋白3维结构显示:几乎上所有的氨基酸变异的多态性位点主要集中在病毒衣壳蛋白的表面。实验二:猪细小病毒VP2基因在重组杆状病毒中的表达及抗原特性分析首先利用PCR扩增VP2基因,将VP2基因转入杆状病毒转移载体pFastBacI中,构建重组的质粒pFastbac-VP2,再将该重组质粒转入DH10Bac感受态细胞中,并获得重组杆状病毒。将得到的重组杆状病毒接种昆虫细胞,通过SDS-PAGE、IFA、Western blot和血凝性鉴定VP2蛋白的表达。将得到的VP2蛋白与MONTANIDE ISA206佐剂乳化后,免疫8周龄豚鼠,采用血凝抑制的方法对疫苗的免疫效果进行评价。结果显示,VP2亚单位疫苗与HN-2011灭活苗及商品化灭活疫苗相比,抗体水平上升较快且高于传统灭活疫苗。
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