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牙周病是一种细菌慢性感染性疾病,主要表现为牙周组织破坏,导致牙齿松动、失牙等。尤其是牙周病中II度以上根分叉病变,牙周组织缺损明显,牙周袋深度增加,局部菌斑控制难度大,常规治疗手段难以治愈,常需要实施引导性组织再生术。但该手术适应症要求严格,术中操作技术性强,再生修复效果缓慢且有限,存在一定的局限性,亟待新的辅助性治疗方式的出现。作为一种安全无创手段,低强度脉冲超声波经FDA认证已应用于促骨折愈合和骨不连临床治疗中并取得了较好的疗效。此外,前期研究发现LIPUS可促进牙槽骨再生,增加新生牙槽骨骨密度和骨成熟度,提示LIPUS作为GTR术辅助手段治疗牙周病具有一定的应用潜力。本实验选用8只成年雄性Beagle犬下颌双侧第二、三、四前磨牙,采用快速去骨与不锈钢丝结扎伴以高糖高粘性饮食饲喂的方法,构建牙周II度根分叉病变模型。将犬随机分为两个时间组(处理6周和处理8周),并将每组24颗实验牙随机分为4个处理组:牙周翻瓣术组、GTR(Bio-Gide胶原膜+犬自体骨移植)术组、牙周翻瓣术+LIPUS组、LIPUS联合GTR(Bio-Gide胶原膜+犬自体骨移植)术组,并且一只犬同一侧如有一颗实验牙选为应用LIPUS辐照后,同侧其他实验牙均不再选入非LIPUS辐照组,以避免LIPUS对邻近组织的影响。LIPUS参数为:ISATA 30mW/cm2或透过胶原膜后强度为30mW/cm2,频率1.5MHz,调制信号波宽200μs,重复率1KHz、20min/d。于处理6周和8周各选取2个处理组对牙周袋内细菌总量和目前公认的牙周致病菌—牙龈卟啉单胞菌,进行实时荧光定量PCR检测。建模8周后牙周袋加深、附着丧失明显、探诊出血,实时荧光定量PCR检测显示建模后牙周细菌总量和P.g数量均较建模前增加,具有统计学差异(P<0.05),证实了构建模型牙周袋内存在与人牙周病相似的致病菌,初步验证了模型构建的合理性,为进行LIPUS联合GTR术对牙周病组织修复作用的研究提供了良好的实验平台。牙周临床指标检查结果:GTR术处理组(包括单纯GTR组和LIPUS联合GTR组)较非GTR组牙周袋深度减少,附着丧失量减少,龈沟出血指数好转,具有统计学差异(P<0.05),但LIPUS辐照组与非LIPUS辐照组间无明显统计学差异,处理6周与处理8周也无明显统计学差异。实时荧光定量PCR结果:牙周细菌总量和P.g数量较治疗前减少,但各处理组间以及处理6周与8周无明显差别。提示LIPUS与GTR术联合,可能不增加局部致病菌,具有安全性。但对P.g是否具有抑制作用以及对其他牙周致病菌作用如何,需要进一步的研究。组织学定性观察结果:GTR术处理组牙周恢复状况良好,牙槽骨修复再生明显,形成牙周新附着; LIPUS联合GTR处理组,组织学观察可见新生牙骨质及大量牙槽骨增生修复,炎症细胞浸润较少,骨成熟度和骨密度较GTR组高,并出现了较完整的修复性牙周膜。Micro-CT检测结果:二维测量结果,相同处理时间, GTR处理组和GTR+LIPUS辐照组新生牙槽骨高度较非GTR处理组明显增加,牙根暴露高度较低,具有统计学差异(P<0.05);GTR+LIPUS辐照组较单纯GTR术处理组牙槽骨高度增加,牙根暴露高度降低,LIPUS辐照组较牙周翻瓣术组牙槽骨高度增加、牙根暴露高度降低,具有统计学差异(P<0.05);处理6周和8周组间测量指标无统计学差异(P>0.05)。三维测量结果,相同处理时间,GTR处理组和GTR+LIPUS辐照组BV、BS、Tb.N较非GTR处理组明显增大,GTR+LIPUS辐照组BV、BS、Tb.N较GTR处理组大,LIPUS辐照组BV、BS、Tb.N较牙周翻瓣术组大,具有统计学差异(P<0.05),Tb.Th值各组间无统计学差异(P>0.05);Tb.N值相同处理组处理8周较6周增大,其他各参数不同处理时间无统计学差异(P>0.05)。综上所述,本研究发现单纯LIPUS辐照可能增加新生牙槽骨骨小梁数量、体积和面积;LIPUS与GTR术联合不增加局部P.g数量,可提高GTR术修复牙槽骨能力,增大新生牙槽骨密度、体积,增加骨成熟度,组织学切片观察提示LIPUS还可能具有促进牙骨质和牙周膜修复,以及减轻局部组织炎症细胞浸润的作用。这提示一定参数的LIPUS(ISATA 30mW/cm2或透过胶原膜后强度为30mW/cm2,频率1.5MHz,调制信号波宽200μs,重复率1KHz、20min/d)作为GTR治疗II度根分叉病变的辅助手段具有潜在的临床应用前景,但辐照时间尚需进一步研究确定。