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睾丸支持细胞可以为生精细胞提供营养物质和细胞因子,营造生精细胞发育所需的微环境；此外,睾丸支持细胞还可通过细胞间的胞桥连接(Gap juncation)构成血睾屏障,防止精原细胞受到各种因素的伤害。每个睾丸支持细胞能支持生精细胞的数量是一定的,因此,哺乳动物睾丸支持细胞的数量对精子的生成量具有决定作用。睾丸支持细胞的数量取决于支持细胞的增殖能力,雌激素在支持细胞的增殖调控中具有重要作用；雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路也参与了哺乳动物多种细胞的增殖,但目前还不清楚mTOR是否参与对睾丸支持细胞增殖的调节。本研.究的目的是确定mTOR是否参与调控睾丸支持细胞的增殖,并确定雌激素是否通过激活mTOR信号通路调节支持细胞增殖。本研究以20日龄左右的仔猪睾丸为实验材料,用17β-雌二醇处理培养的支持细胞,采用Western blotting检测细胞中17p-雌二醇对mTOR磷酸化的影响；添加ERK1/2和PI3K/Ak的特异性抑制剂预处理培养的支持细胞,然后用17p-雌二醇处理培养的支持细胞,用Western blotting检测信号通路抑制剂对17β-雌二醇诱导细胞中mTOR磷酸化的影响；添加不同浓度的mTOR特异性抑制剂rapamycin预处理培养的支持细胞,利用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测rapamycin对17p-雌二醇诱导支持细胞增殖的影响,同时利用流式细胞术检测细胞周期进程的变化；最后用mTOR特异性抑制剂rapamycin预处理培养的支持细胞,然后利用Western blotting以及荧光定量PCR检测17p-雌二醇诱导的与细胞增殖有关的S期相关蛋白激酶(Skp2)、细胞增殖核抗原(PCNA), Cyclin E1和Cyclin D1蛋白及其mRNA表达水平的变化,同时利用Western blotting检测与Skp2蛋白表达水平和降解有关的视网膜母细胞瘤抑制蛋白(Rb)和细胞有丝分裂前期抑制剂(Emil)的蛋白丰度变化。实验结果发现：在0-90min,17p-雌二醇(1nmol/L)以时间依赖的方式促进了mTOR磷酸化,其作用效果在30min时最强(P<0.05)；细胞外调控激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂U0126和蛋白激酶B(Akt)特异性抑制剂10-DEBC均可显著地降低17β-雌二醇诱导的mTOR磷酸化作用(P<0.05)；mTOR特异性抑制剂rapamycin能够减少17p-雌二醇诱导的支持细胞增殖,rapamycin也能降低17p-雌二醇诱导的支持细胞从G1期向S期的转换(P<0.05)；mTOR特异性抑制齐(?)rapamycin抑制了17p-雌二醇诱导的Skp2蛋白、PCNA蛋白、Cyclin E1mRNA和Cyclin D1mRNA的表达(P<0.05)；mTOR特异性抑制剂rapamycin还抑制了对Skp2的蛋白表达和降解具有重要调控作用的Rb的磷酸化以及Emil的蛋白表达(P<0.05)。综上所述,17β-雌二醇通过ERK1/2和PI3K/Akt路径磷酸化激活mTOR信号,进而通过活化的mTOR对Skp2、PCNA、Cyclin E1和Cyclin D1的表达产生影响。激活后的mTOR也促进了Rb的磷酸化作用和Emil的表达,从而从转录和蛋白降解两方面调节Skp2的表达,进而促进支持细胞的增殖。