论文部分内容阅读
目的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后于损伤处移植周围神经或雪旺细胞(Schwann cells,SCs)能够促进神经元的存活、轴突的再生及功能恢复,海藻酸钡微囊的免疫隔离效应使得异种移植成为可能。本实验将预变性处理后的家兔坐骨神经组织细胞微囊化后移植到大鼠SCI处,观察大鼠脊髓半横断损伤后植入微囊化兔坐骨神经组织细胞对降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene-related Peptide,CGRP)表达变化及对运动终板(Motor Endplate,MEP)再生的影响,初步探讨微囊化异种坐骨神经组织细胞移植治疗脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)修复的可能机制及CGRP的表达与运动终板再生的关系。方法取健康成年家兔8只,体重3200～3600g;健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠80只,体重200～250g,雌雄不限,随机分为4组:A组(微囊化坐骨神经组织细胞移植组,n=24);B组(组织细胞悬液移植组,n=24);C组(单纯损伤对照组,n=24);D组(假手术组,n=8)。分好组后对各组大鼠行右后肢运动功能BBB评分。无菌条件下取成年家兔预变性处理的双侧坐骨神经干制成组织细胞悬液,低速离心后与1.5%海藻酸钠溶液混合并喷入20mmol/L的氯化钡溶液中制成微囊化坐骨神经组织细胞悬液。A、B、C组建立大鼠T10脊髓右半横断损伤模型,并分别在损伤处移入吸附10μl的微囊化组织细胞悬液的明胶海绵、组织细胞悬液的明胶海绵及明胶海绵,D组只去除椎骨,不损伤脊髓也不移植。术后1w、2w、4w、8w,各组每时相取6只(D组取2只)大鼠行右后肢运动功能BBB评分后被麻醉用4%多聚甲醛经心灌注,取脊髓损伤水平以下8mm脊髓组织,假手术组大鼠则取相应脊髓节段。石蜡切片后行HE及CGRP免疫组化染色。另外,各组取右后肢整块腓肠肌行HE及运动终板的氯化金染色。结果SCI后各组大鼠右侧脊髓前角CGRP阳性细胞数显著减少,1w后均不同程度的逐渐恢复。SCI后1w,A、B组间右侧脊髓前角CGRP阳性细胞数差异无显著性,但两者较C组有差异(P <0.05);SCI后2w、4w、8w,A组右侧脊髓前角CGRP阳性细胞数明显增多(P <0.01),但未达到正常水平。B、C组间差异无意义。光镜下观察,假手术组肌纤维排列有序,正常运动终板体积完整呈椭圆或卵圆形,轴突终未形成众多细支盘绕在肌纤维上,可见较多终板核。SCI后前2w各组运动终板在着色、数量上无明显差别(P >0.05);4w时各组肌纤维运动终板开始出现退变,终板染色变浅,轴突终末分枝减少,终板核减少,A组退变程度很轻,与B、C组比较有差异(P <0.05);8w时B、C两组运动终板明显退变,出现大的染色空白区,终板减少甚至消失,显示模糊的轮廓,但A组退变程度轻,与B、C组比较有显著性差异(P <0.01),呈现再生趋势。右后肢运动功能BBB评分假手术组各时相均正常;而其余各组术前正常,但SCI后1w均很低,各组间无明显差别;之后逐渐升高,2w时A组与B、C组比较有差异(P <0.05);4w、8w时A组升高程度较B、C组要大,差异有显著性(P <0.01),但未达到正常水平。大鼠右后肢运动功能有不同程度的恢复,以微囊组恢复最好。结论微囊化兔坐骨神经组织细胞移植可促进损伤神经元的修复及运动终板的再生,并可增加CGRP的表达;脊髓前角CGRP的表达变化与运动终板的再生相一致。