论文部分内容阅读
浙东白鹅是我国的地方优势品种,在浙江地区有着广泛的养殖。过去生鹅皮常用来制作鹅裘皮,但随着制革行业对于鹅皮的需求量减少,越来越多的鹅皮被直接丢弃,既造成了生物资源的极大浪费,又造成环境污染。胶原蛋白的提取方法主要有酸法,碱法和酶法等,而胶原肽一般通过水解胶原蛋白或明胶的方法获得的。研究表明,胶原肽具有诸多生理活性--抗氧化功能、降血压作用、提高机体对矿物元素的吸收能力、增强免疫力、抗菌作用等。本文以浙东白鹅鹅皮为研究对象,研究鹅皮胶原活性肽提取的最佳工艺,再分别探讨鹅皮胶原活性肽的体内和体外生理功能。主要研究成果如下：一、响应面优化酸提鹅皮胶原蛋白的工艺：使用乙醚去除鹅皮脂肪；选用乳酸为浸提溶液,控制pH1.9、料液比1：50(g/mL)、浸提时间为60h,鹅皮胶原蛋白提取率最高,且纯度最好,分别为30.12%和92.01%。所得鹅皮胶原蛋白经分析鉴定为具有完整三螺旋结构的Ⅰ型胶原蛋白。二、选取风味蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶复合水解鹅皮胶原蛋白,以水解率DPPH.清除率,苦味值为指标,四因素三水平正交优化后得到最佳工艺。在木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=1：1的比例下,加酶量4000U·g-1,温度50℃,pH6.0,水解5h后,所得鹅皮胶原蛋白肽的水解度和DPPH.清除率最高,分别为28.3%和89.2%,且没有苦味。经Sephadex G-75分离纯化后获得DPPH.清除率最高的P4组分,经分析鹅皮胶原多肽P4组分感官评价、溶解能力和乳化能力均较好。三、建立D-半乳糖致衰小鼠模型,观察鹅皮胶原多肽P4组分对小鼠体内抗氧化性的影响。小鼠的安全性试验表明胶原多肽对小鼠生长无抑制性和致敏性。在此基础上,进行小鼠分组试验,将小鼠分为正常对照组、D-半乳糖致衰模型组、低剂量鹅皮胶原蛋白肽灌胃组、高剂量鹅皮胶原蛋白肽灌胃组和VE对照组。试验表明灌胃高低浓度的鹅皮胶原蛋白肽后的致衰小鼠血清中的总胆固醇(TC)含量、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量、动脉硬化指数(LDL-C/HDL-C)等指标都显著降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量和抗动脉粥样硬化因子(HDL-C/TC)水平显著增加；试验还表明,灌胃鹅皮胶原多肽P4组分后,致衰小鼠血清和肝脏中的MAD含量降低,SOD、TAC、GSH-Px及CAT等酶酶活显著提高。此外,对小鼠脾脏指数及胸腺指数的测定发现鹅皮胶原多肽P4组分对小鼠免疫能力有一定提高作用。四、体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,研究鹅皮胶原多肽P4对小鼠B16黑色素瘤细胞黑素中合成的影响。当鹅皮胶原多肽P4浓度达到100μg/ml时,黑素降低33.11%(P<0.01),酪氨酸酶活性降低27.76%(P<0.01)；使用含有鹅皮胶原多肽P4的完全培养液培养B16黑素瘤细胞时,细胞中GSH水平升高,GSSH水平降低,有效地提高了细胞内还原能力；随着鹅皮胶原多肽P4浓度的升高,cAMP含量逐渐下降,在浓度为50μg/ml时,细胞中CAMP含量下降40.75%(P<0.01),抑制了B16黑素细胞中黑素的合成。