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目的:使用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测过敏性哮喘合并鼻炎患儿的外周血嗜碱性粒细胞活化率（%CD63+）,从而分析嗜碱性粒细胞活化试验（basophil activation test,BAT）在粉尘螨致敏诊断及监测皮下免疫治疗（subcutaneous immunotherapy,SCIT）中的应用价值及其临床相关性。方法:1、研究对象及方法本研究为前瞻性研究。研究对象为2018年10月至2019年5月就诊于天津医科大学第二医院儿科哮喘专病门诊的儿童。入组年龄为5-12岁,初诊确诊为哮喘合并鼻炎且粉尘螨致敏患儿22例作为致敏组,平均年龄（8.0±2.6）岁;非粉尘螨致敏患儿7例作为非致敏组,平均年龄（6.6±1.8）岁;另取健康儿童4例作为对照组,平均年龄（5.8±1.0）岁。分别用1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml粉尘螨提取液作为刺激源,以CD123、HLA-DR联合设门,获取嗜碱性粒细胞,采用FCM检测%CD63+,从而反映嗜碱性粒细胞的活化程度。通过分析比较以上三组儿童%CD63+,从而评估BAT在粉尘螨致敏诊断中的作用及其与皮肤点刺试验（skin prick tests,SPT）、血清总IgE（total IgE,TIgE）、特异性IgE（specific IgE,sIgE）、sIgE/TIgE、特异性IgG4（specific IgG4,sIgG4）、肺通气功能中的第1秒用力呼气容积（forced expiratory volume in one second,FEV1）占预计值的百分比（FEV1%pred）、呼出气一氧化氮（fractional exhaled nitric oxide,Fe NO）及儿童哮喘控制测试（children asthma control test,C-ACT）、鼻炎视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）之间的相关性。致敏组中,15例接受规范化SCIT者进行纵向疗效监测,6个月后再次评估%CD63+、sIgG4及相关临床指标,分析其内在联系。2、统计分析采用SPSS 20.0软件进行分析,计量资料不服从正态分布,用中位数（四分位数间距）[P50(P25-P75)]表示,采用非参数检验之Kruskal-Wallis H秩和检验;服从正态分布用?X±SD表示,采用单因素ANOVA。计数资料采用卡方检验和Fisher精确检验。病例资料采用Pearson和Spearman相关性分析,对%CD63+与临床指标之间的相关性进行评估;用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分别对BAT（CD63）与sIgE两种方法在粉尘螨致敏诊断作以比较;p<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、人口学特征共纳入33名研究对象,其中致敏组、非致敏组和对照组分别为22例、7例和4例,三组在年龄、性别、家族过敏史和TIgE水平等差异无统计学意义（p>0.05）;致敏组粉尘螨sIgE水平显著高于非致敏组和对照组（p<0.05）。2、BAT中CD63阳性表达流式图选取HLA-DR阴性且CD123阳性的细胞即为嗜碱性粒细胞,并可体现嗜碱性粒细胞的活化。3、不同刺激浓度下致敏组嗜碱性粒细胞活化率比较粉尘螨致敏组在1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml的粉尘螨提取液刺激浓度下%CD63+平均水平分别为22.3（12.1-37.2）%、29.0（16.2-53.4）%、40.8（22.4-65.4）%,整体呈现出递增的浓度依赖趋势,差异有统计学意义（p<0.05）。少部分个体在100μg/ml刺激浓度下%CD63+较前者（10μg/ml）降低,活性受到抑制。4、不同组别间嗜碱性粒细胞活化率比较在1μg/ml浓度刺激下致敏组、非致敏组、对照组外周血%CD63+平均水平分别为22.3（12.1-37.2）%、4.2（2.3-6.3）%、2.7（2.0-4.0）%,致敏组明显高于其它两组,差异有统计学意义（p<0.05）。在10μg/ml浓度刺激下致敏组、非致敏组、对照组外周血%CD63+平均水平分别为29.0（16.2-53.4）%、5.5（2.7-10.1）%、5.1（2.4-6.5）%,致敏组明显高于其余两组,差异有统计学意义（p<0.05）。在100μg/ml浓度刺激下致敏组、非致敏组、对照组外周血%CD63+平均水平分别为40.8（22.4-65.4）%、12.3（9.4-15.5）%、8.2（5.3-10.4）%,致敏组明显高于其余两组,差异有统计学意义（p<0.05）。5、嗜碱性粒细胞活化率、sIgE评估粉尘螨致敏的诊断价值以SPT作为金标准,ROC曲线分析BAT用于粉尘螨致敏诊断结果显示,在1μg/ml刺激浓度下,ROC曲线下面积（area under curve,AUC）为0.992,其敏感度及特异度分别为77.3%,100%;在10μg/ml刺激浓度下,AUC为0.967,其敏感度及特异度分别为81.8%,100%;在100μg/ml刺激浓度下,AUC为0.930,其敏感度及特异度分别为72.7%,91%。前三项AUC均高于sIgE用于粉尘螨致敏诊断AUC 0.893,其敏感度及特异度为77.3%,100%。BAT结果中出现3例假阳性结果,占比9.1%;出现2例假阴性结果,占比6.1%。6、嗜碱性粒细胞活化率与临床指标的相关性分析Spearman等级相关分析显示%CD63+与SPT等级间呈正相关,差异有统计学意义（p<0.05）。Pearson直线相关分析显示%CD63+与sIgE、sIgE/TIgE、鼻炎VAS之间呈正相关,与C-ACT呈负相关,差异有统计学意义（p<0.05）;与TIgE、FEV1%pred、FeNO无相关性（P>0.05）。7、SCIT前后嗜碱性粒细胞活化率的变化致敏组中15例接受SCIT者进行纵向疗效监测,在1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml刺激浓度下脱敏前%CD63+平均水平分别为27.8（13.0-45.9）%、33.2（16.2-64.7）%、45.2（27.4-69.0）%,脱敏后平均水平分别为15.3（10.2-22.6）%、16.0（13.4-45.0）%、30.5（20.0-50.3）%,较前下降,差异有统计学意义（P<0.05）。8、SCIT前后s Ig G4、鼻炎VAS、C-ACT的变化致敏组中,对15例经规范化SCIT 6个月的患儿治疗前后分别监测sIgG4,脱敏前平均水平为（1.30±0.32）AU/m L,脱敏后为（1.35±0.33）AU/m L,脱敏后较脱敏前增加,差异有统计学意义（P=0.025）。脱敏前鼻炎VAS平均水平为（4.33±3.18）分,脱敏后为（2.20±1.47）分,较前降低,差异有统计学意义（P=0.001）。脱敏前C-ACT平均水平为（19.07±2.60）分,脱敏后为（22.93±2.63）分,较前升高,差异有统计学意义（P=0.000）。结论:1、BAT是哮喘合并鼻炎儿童粉尘螨致敏诊断的一项安全、有效的体外检测方法,且在症状严重程度评估方面具有较好的临床相关性。2、规范化SCIT（6个月）后哮喘合并鼻炎儿童症状得到改善,BAT及sIgG4可作为评估SCIT疗效的生物标志物,且嗜碱性粒细胞活化率的改变与sIgG4的诱导产生存在内在联系。