舒血宁注射液为银杏叶提取物制剂,而对银杏叶的研究与开发利用在近半个世纪也已风靡世界。通过长期的研究,银杏叶提取物的药效作用、药理机制和临床应用都得到了广泛认可、全面认识和深入研究。北京市药品检验所在2009年国家中药注射剂评价性抽验中,发现不同生产企业,舒血宁注射液生产过程有差异,导致某些生产因素可能影响临床安全与有效；为进一步丰富药效学基础研究资料,保证其安全有效,因此对其药效学进行再评价,药效学的再评价主要包括心肌缺血、脑缺血、血栓、微循环等四个主要方面实验。目前中药成分复杂,而单一的控制少数指标性成分难以控制药物的安全性和有效性,这就迫使我们对现有的中药质量控制方法进行改进。生物检定法最近几年日趋成熟,且在某些西药质量控制中生物检定法已经占据了主导地位,因此利用生物检定法对于中药进行质量控制已是一种必然的趋势。2010年版中国药典一部中,增加了中药的生物活性测定研究指导原则,为了进一步完善中药质量控制方法,说明在中药尤其是中药注射剂质量标准中增订生物活性测定项,已经是一种方向。如果能够率先在中药质量标准中制定生物活性测定项,会很大程度提高中药质量控制的准确性,加快中药现代化进程。因此本课题对舒血宁注射液成品几个基本药理作用进行深入研究,通过科学设计给药剂量与实验指标,为保证舒血宁注射液在临床中安全有效的使用,提供基础性研究资料。药效学研究发现舒血宁注射液在体内外对血小板聚集均有较好的抑制作用,并且量效关系明确,以该生物效应为基础,以生物统计为工具,运用特定的实验设计,量化药物的生物活性,建立舒血宁注射液的体外血小板聚集生物活性检定方法学,对其质量控制的方法进行补充。实验主要包括药效学再评价和体外血小板聚集生物活性测定法两部分内容,下面进行分别论述。第一部分舒血宁注射液药效学再评价一、舒血宁注射液对心肌缺血的保护作用：采用舌下静脉注射垂体后叶素造成大鼠急性心肌缺血模型,考察造模前后及给药后心电图ST段及心率变化,心肌梗死面积变化,血清中LDH、CK、MDA、SOD等生化指标的变化。结果表明,舒血宁注射液能够抑制心肌缺血大鼠第一期ST段的升高,第二期ST段的降低,对抗由垂体后素引起的大鼠心率的减慢。同时能够降低心肌缺血的阳性率和心率失常的发生率,降低心肌缺血大鼠心肌的梗死面积和梗死率。能够降低血清中LDH、CK、MDA的含量,提高血清中SOD的活性。因此舒血宁注射液抗心肌缺血的机制可能与降低心肌细胞内有害酶类释放,改善自由基的代谢紊乱,抗氧化作用有关。二、舒血宁注射液对脑缺血的保护作用：采用小鼠结扎双侧颈总动脉的实验性脑缺血模型,给药后结扎小鼠双侧颈总动脉及迷走神经,考察小鼠存活时间、脑梗死面积、脑指数、对脑内MDA、SOD、LDH等相关生化指标进行测定。结果表明舒血宁注射液能够延长急性不完全性脑缺血小鼠的存活时间,减轻脑水肿,减小脑梗死面积,降低梗死率。同时能够提高脑内组织中SOD的含量,降低MDA含量,减轻自由基损伤,减少脑组织内LDH的释放,对抗脑组织的氧化损伤,加强对脑组织的保护作用,因此舒血宁注射液改善脑梗死的作用机制可能与其抗氧化作用有关。三、舒血宁注射液抗血栓作用：采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冰浴,造成急性血瘀模型大鼠,造模成功后1h给药一次,手术前15min再给药一次,进行电刺激颈总动脉形成血栓,记录血栓形成时间及血栓长度,测定血浆中凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)和血小板聚集情况,测量全血及血浆的粘度。舒血宁注射液能够延长血瘀模型大鼠成栓时间,缩短成栓长度,明显延长成栓50%的时间,对血栓初步形成有较好的抑制作用。它还能降低血瘀模型大鼠血浆中血小板聚集率,延长凝血酶原(PT)和活化部分凝血酶原(APTT)凝集时间,降低全血粘度和血浆粘度,因此舒血宁注射液抗血栓的作用机制可能与降低血小板聚集率,延长凝血时间和降低血液粘度有关。四、舒血宁注射液对微循环改善作用：考察给药对正常及血瘀模型小鼠耳廓微动脉、微静脉、毛细血管交叉开放数的影响,由结果可以看出舒血宁注射液能够扩张正常小鼠耳廓微动脉与微静脉的管径,增加毛细血管交叉网开放数；扩张血瘀模型小鼠缩小的微动脉和微静脉管径,增加毛细血管交叉网开放数,改善血瘀模型小鼠血液流态,使其大部分从粒缓流变为线粒流,进而表明舒血宁注射液具有改善微循环的作用,且具有较好的剂量依赖性。第二部分舒血宁注射液对体外抑制血小板聚集的生物活性测定法的建立采用ADP和PAF两种诱导剂,对舒血宁注射液和金纳多注射液进行体外抑制血小板聚集实验,结果表明舒血宁注射液对ADP、PAF诱导的体外血小板聚集有较好的抑制作用。并且通过线性关系考察,发现经一次对数转化的最大血小板聚集率与药物剂量有较好的线性关系。以金纳多注射液为标准品,采用生物检定法中的量反应平行三三法进行效价测定,同时进行可靠性检验和重复性考察。可靠性检验均合格表明该方法得到的测得效价可靠,重复性考察表明,建立的两种诱导剂诱导体外血小板聚集的生物活性测定方法,测定出的舒血宁注射液生物效价可靠,重现性较好,具有一定的可行性,可以进行更深入的研究,加快生物活性测定法用于中药质量控制的进程。