目的：探讨研究转化生长因子-β2(TGF-β2)对兔骨髓间充质干细胞体外培养增殖及成骨诱导的影响并探讨骨髓间充质于细胞在TGF-β2浓度0.1-10ng/mL范围内的细胞最适宜增殖浓度以及最适宜成骨分化浓度,为转化生长因子-β2(TGF-β2)进一步实验室研究及体内研究提供可靠的理论依据。方法：1、用新西兰大白兔—只,取出双侧股骨干。用贴壁法分离纯化细胞。置于培养箱中,3至4天观察并换液,至细胞长满后传代,此时记为P1代：当传至P3代时,使用免疫组化检测贴壁细胞的表面标记物CD44,证实所得的细胞为骨髓间充质干细胞,并用P1、P3、P5三代细胞行MTT法绘制细胞生长曲线,比较三代细胞生长活力,行选取最优细胞用于后续实验。2、将P3代骨髓间充质干细胞,以2×104/ml的密度接种于96孔培养板中,每孔加入200ul细胞悬浊液。分为四个组：A组-对照组(不加TGF-β2),B组加入0.1ng/ml的TGF-β2, C组加入1.0ng/ml的TGF-β2, D组加入10ng/ml的TGF-β2。对照组及实验组均用相同成分的成骨培养基。分别于第1天,3天,5天,7天四个时间点取一块板。每一浓度设3个复孔,行MTT检测来测定不同TGF-β2对骨髓间充质干细胞增殖的影响；每一浓度再分别设置3个复孔检测碱性磷酸酶的活性,以此来测定不同TGF-β2对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的能力的影响；每一浓度也分别设置3个复孔行甲基百里香酚兰(MTB)法测定游离钙浓度,以研究TGF-β2是否促进骨髓间充质干细胞成骨诱导,并找出最佳TGF-β2活性浓度。3、将P3代骨髓间充质干细胞接种于6孔板中,一共接种4板,每块板接种4孔,共取16个样品。分为对照组与实验组,分组同上。分别于第1天,3天,5天,7天四个时间点取出诱导后的细胞,弃培养基,用PBS洗一次；再用2ml4%多聚甲醛固定细胞30分钟；PBS洗细胞两次,每孔加入lml茜素红染色工作液,室温孵育3-5分钟；再用PBS洗3次,在显微镜下观察钙结节情况。结果1、骨髓间充质干细胞分离培养后最初培养器中造血细胞成份较多,随着时间的延长,这些杂质细胞慢慢坏死或随换液移去,2日后能够见到部分细胞开始贴壁生长,大约4日后可见大量细胞贴壁,成集落,细胞开始呈长梭形,形似成纤维细胞,呈放射状生长。培养至12天左右,细胞融合超过90%予以传代,培养到第3代后,骨髓间充质干细胞就较纯粹,极少杂质细胞。描绘细胞生长曲线显示,P3代骨髓间充质干细胞细胞活性最强。对培养细胞用免疫组化进行分析,发现骨髓间充质干细胞的特异性抗体骨髓间充质干细胞表面表达CD29为96%,CD34为5%,CD44为95%。骨髓基质干细胞对CD34不表达,而对CD44表达；而造血系细胞对CD34表达,对CD44不表达,以此鉴定骨髓基质干细胞细胞表型及细胞纯度的分析。2、MTT检测细胞生长动力学,经实验结果表明：骨髓间充质干细胞在含有TGF-β2的培养基中生长,吸光度数值均比其对照组(无TGF-β2的培养基)中的光吸收度数值要高。B组、C组、D组在不同时间点的OD值均高于A组,即B、C、D组均有促进骨髓间充质干细胞增殖的作用；C组在不同时间点的OD值高于A组、B组及D组,说明C组较其他各组增殖作用强,即当培养基中的TGF-β2浓度为1.0ngl/ml时,细胞增殖最佳。3、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒法测定促进骨髓间充质干细胞成骨分化最佳TGF-β2活性浓度,实验结果表明：A组(无TGF-β2)中碱性磷酸酶—直处于较低水平的表达,而其余组的ALP表达均较其显著升高,进一步行两两比较,发现B,C,D组中又以C组(TGF-β2浓度为1.0ng/m1)的碱性磷酸酶活性表达最高,说明C组(TGF-β2浓度为1.0ngl/m1)促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用最强。4、甲基百里香酚兰(MTB)法测定游离钙,应用甲基百里香酚兰(MTB)法测定游离钙,B、C、D组钙离子浓度均比其对照组(无TGF-β2的培养基)高,说明B、C、D组均有促进骨髓间充质干细胞成骨诱导的作用；C组在不同时间点的钙离子浓度高于A组、B组及D组,说明C组较其他各组促进骨髓间充质干细胞成骨诱导的作用强,即当培养基中的TGF-β2浓度为1.0ngl/ml时,可以获得最积极的成骨诱导。5、茜红素染色,在显微镜下可以观察到观察钙积累,并且当培养基中的TGF-β2浓度为1.0ngl/ml时,钙结节产生最多。结论1、TGF-β2对兔骨髓间充质干细胞的增殖有促进作用,并且在所分组中最佳作用浓度为1ng/mL;2、TGF-β2可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并且在所分组中最佳作用浓度为lng/mL;3、TGF-β2可促进骨髓间充质干细胞形成钙化结节,并且在所分组中最佳作用浓度为lng/mL。