【摘 要】
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背景碳青霉烯类抗生素在临床的广泛使用甚至滥用,造成了临床病原生物检测中耐碳青霉烯类肠杆菌的检出率逐年攀升。其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）在我国多个省份多家医院都有检出,且比例最高,已成为临床感染逐年升高的主要原因之一。CRKP的耐药机制多种多样,其中产碳青霉烯酶是KPC（Klebsiella pneum
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背景碳青霉烯类抗生素在临床的广泛使用甚至滥用,造成了临床病原生物检测中耐碳青霉烯类肠杆菌的检出率逐年攀升。其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）在我国多个省份多家医院都有检出,且比例最高,已成为临床感染逐年升高的主要原因之一。CRKP的耐药机制多种多样,其中产碳青霉烯酶是KPC（Klebsiella pneumoniae Carbapenemase）型耐药的主要原因。KPC型有多种突变体,我国常见的为KPC-2,但不同地区存在差异。这种差异导致了分子特征和耐药机制的不同,进而产生对头孢他啶阿维巴坦等碳青霉烯类抗生素的耐药。目的了解豫北地区肺炎克雷伯菌的耐药现状,探讨豫北地区产酶型肺炎克雷伯菌的酶基因分型及分子特征,分析不同酶型的耐药率,为临床用药提供指导。方法1.收集新乡医学院第一附属医院2018年1月到2021年12月经鉴定为CRKP菌株135株,使用碳青霉烯酶检测试剂盒检测135株菌株的酶型并统计;2.提取产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的DNA,设计引物,PCR扩增KPC、NDM、IMP基因;3.用琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物,与目的条带进行对比;4.回收DNA进行测序,将测序所得目的基因通过NCBI在线官网进行Blast比对测序结果;5.统计不同酶型基因的亚型,将相同酶亚型通过MEGA软件进行多序列比对,构建进化树,统计不同分支序列的差异;6.通过药物敏感性试验,统计不同酶亚型菌株的药物敏感性。结果1.收集的135株CRKP菌株中,产碳青霉烯酶的133株。其中124株携带KPC耐药基因,9株携带NDM耐药基因,1株同时携带IMP和NDM耐药基因;2.124株携带KPC耐药基因琼脂糖凝胶电泳试验全部获得目的条带,与碳青霉烯酶检测试剂盒所得结果一致。经BLAST比对均为同源性达99%-100%的KPC-2型,9株NDM型菌株经BLAST比对为NDM-1型,1株IMP型菌株经BLAST比对为IMP-4型。3.构建的进化树将124株KPC-2型耐药基因分为3大支3小支,多序列基因比对中同源性不足100%的菌株在某些碱基位上存在点突变。4.药物敏感试验显示,产酶的133株对β-内酰胺类抗生素全耐药,124株产KPC型菌株中对阿米卡星（氨基糖苷类）的耐药率为83.1%,对四环素（四环素类）的耐药率为49.4%,对氯霉素和复方新诺明的耐药率分别为44.4%和58.9%,对头孢他啶阿维巴坦的耐药率为2.42%;9株产NDM型菌株中8株对头孢他啶阿维巴坦耐药,1株对其敏感;在9株中同时产NDM和IMP的菌株也对头孢他啶阿维巴坦耐药。结论1.豫北地区肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物不敏感的主要原因是产碳青霉烯酶,而且在众多编码碳青霉烯酶基因的基因型中KPC型最常见,其亚型主要为KPC-2;2.KPC-2型碳青霉烯酶基因中某个碱基的缺失、插入、置换不影响KPC-2型碳青霉烯酶的表达,因此对β-内酰胺类药物的耐药性不受影响;3.头孢他啶阿维巴坦能有效治疗因产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌造成的临床感染。
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