我国近10年肺结核发病率分析及结核分枝杆菌快速检测方法研究

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目的:1.以省级行政区域为研究对象,建立2004-2012年全国31个省(自治区、直辖市)肺结核地理信息数据库,制作肺结核发病的专题地图,并描述我国肺结核发病在时间、地点、人群的“三间分布”特征,确定2004-2012年我国肺结核高发区、高发期和高危人群,为部队肺结核防控关键技术研发提供依据。2.筛选结核分枝杆菌特异性的基因作为LAMP检测的靶基因序列,设计并筛选特异性的引物,用检测浊度法和钙黄绿素染色法对该引物的特异性与灵敏性测试,为部队结核病现场快速检测提供一种新的检测与判断方法。方法:1.近10年肺结核发病率分析1.1.数据收集和处理的方法利用中国疾病监测信息报告管理系统,收集研究区域内肺结核网络报告数据和人口信息,利用Excel2010软件,对数据进行比对筛选和排序整理。1.2利用ArcGIS9.0软件,建立我国各省结核地理信息数据库,从时间、空间、人群三方面,对我国结核发病分布特征进行描述性分析。2.结核分枝杆菌快速检测方法研究2.1引物筛选通过NCBI在线数据库的检索,选择结核分枝杆菌的特异性保守序列IS6110为靶序列,并针对这一序列用软件(Primer Explorer4)设计特异性的LAMP引物,并筛选最佳引物。2.2特异性评价用筛选的最佳引物分别检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,评价该引物检测结核分枝杆菌的特异性。2.3灵敏性评价将提取的结核分枝杆菌DNA进行10倍梯度稀释,用该引物进行检测,评价其灵敏性与传统PCR方法的差异。结果:1.近10年肺结核发病率分析1.1全国肺结核发病概况2004-2012年我国31个省、直辖市和自治区,共报告肺结核发病病例9663,728例,死亡26,932例,十年来我国肺结核病例报告总体呈下降趋势。1.2全国肺结核空间分布情况新疆肺结核年均发病率为181.42/10万居全国首位,贵州、海南、广西、重庆、西藏、黑龙江六省(直辖市、自治区)年均发病率次之,北京、山东、上海和天津四省(直辖市)年均发病率低于50/10万。1.3全国肺结核时间分布情况从2004-2012年我国肺结核月均发病率来看,一、二季度肺结核发病率较高,三、四季度肺结核发病率较低,其中,1月和3月发病率较高且相近,自3月份起发病率逐月下降,12月发病率为一年中最低。1.4全国肺结核人间分布情况肺结核患者中男性高于女性;从年龄分布上看,14岁以下人群年均发病率较低,老年人(60岁以后)年均发病率最高。从职业分布上看,我国肺结核发病主要以农民为主。2.结核分枝杆菌快速检测方法研究2.1最佳引物筛选以结核分支杆菌IS6110基因序列为靶序列,设计5套LAMP引物为反应引物,以结核分枝杆菌为模板在浊度仪中进行LAMP反应,结果显示引物JH164组为最佳扩增引物。2.2JH164引物检测结核分枝杆菌的特异性检测实验用JH164引物对14种细菌DNA进行检测,结果显示,JH164引物具有良好的特异性。2.3JH164引物检测结核分枝杆菌灵敏性实验用JH164引物分别用浊度法和钙黄绿素染色法进行检测,检测10倍梯度稀释的结核分枝杆菌DNA,结果显示,用JH164引物进行LAMP结核分枝杆菌检测的灵敏性是传统PCR方法的10倍,最低检测值为:101pg/μl。结论:1.在过去的10年,我国肺结核发病率呈总体下降趋势,但防控形势依然严峻。我国肺结核病在新疆发病率最高,提示该地区结核病防控应作为重点。从发病时间来看,我国肺结核发病多集中在一、二季度,提示此时为结核病多发季节,应做好结核病防控措施。从人群角度来看,肺结核患者多为务农者,以男性为主,老年人发病率较高。2.用LAMP方法检测结核分枝杆菌具有简单、快速、特异性高、灵敏性好的特点,而且反应在恒温状态下即可发生,反应成本低,是一种非常适用于基本部队的结核分枝杆菌快速检测技术,如果使用钙黄绿素染色法,在其反应结果判断方面则更为简单,对结核病疫情的早期控制和结核病患者的早发现、早诊断、早治疗具有十分重要的意义。
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