【摘 要】
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目的:本实验通过观察补肾活血方对血管性痴呆（Vascular Dementia,VD）肾虚血瘀证大鼠模型行为学、病理形态以及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和P62表达的影响,从调节自噬的角度探讨补肾活血方对VD肾虚血瘀证大鼠神经细胞的保护作用。方法:选取52周龄SD雄性大鼠50只,随机分为假手术组（Sham组）、模型组（VD组）、模型+补肾活血方组（BSHX组）、模型+雷帕霉素组（Rap组）
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目的:本实验通过观察补肾活血方对血管性痴呆（Vascular Dementia,VD）肾虚血瘀证大鼠模型行为学、病理形态以及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和P62表达的影响,从调节自噬的角度探讨补肾活血方对VD肾虚血瘀证大鼠神经细胞的保护作用。方法:选取52周龄SD雄性大鼠50只,随机分为假手术组（Sham组）、模型组（VD组）、模型+补肾活血方组（BSHX组）、模型+雷帕霉素组（Rap组）和模型+3-甲基腺嘌呤组（3-MA组）,每组10只大鼠。高龄鼠采用两血管阻断法（2-VO）建立VD模型;假手术组分离颈总动脉但不结扎。BSHX组中药灌胃治疗28天;自噬干预组于造模前30min侧脑室给药。通过水迷宫检测大鼠学习记忆能力的差异;通过尼氏染色和透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）观测大鼠海马区病理形态变化和超微结构变化;采用蛋白免疫印迹（Western blot）法和反转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测大鼠海马自噬蛋白Beclin-1、P62以及微管相关蛋白1轻链3（LC3）的蛋白及mRNA表达情况。各组数据用SPSS 25.0统计软件进行分析处理。结果:1.大鼠Morris水迷宫行为学差异的比较与Sham组比较,VD组大鼠逃避潜伏期增长,穿越原平台次数及目标象限停留时间减少（P＜0.05）;与VD组比较,BSHX组大鼠逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数及目标象限停留时间延长,3-MA组目标象限停留时间有所增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.大鼠脑海马病理形态观察的比较Sham组大鼠细胞形态正常,结构完整,尼氏小体数量多,未观察到自噬结构;VD组和Rap组大鼠神经细胞排列紊乱,尼氏小体鲜见,细胞器缺失,可观察到大量自噬小体;BSHX组和3-MA组的细胞形态及数量较VD组均有改善,可观察到尼氏小体,自噬小体鲜见。3.大鼠脑海马Beclin-1、P62以及LC3蛋白和mRNA表达水平的比较与Sham组比较,VD组Beclin-1和LC3的蛋白表达和mRNA表达水平显著提升,P62蛋白和mRNA的表达水平显著降低（P＜0.05）;与VD组比较,BSHX组和3-MA组大鼠Beclin-1和LC3的蛋白表达和mRNA表达水平明显下降,P62蛋白和mRNA的表达水平明显上升,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.通过对高龄鼠2-VO法制备的肾虚血瘀VD模型给予补肾活血方灌胃治疗干预,大鼠的行为学有所好转,大脑病理形态明显改善。以方测证,进一步论证了 VD肾虚血瘀病证结合模型的合理性。2.VD的发病过程伴随着自噬的发生,激活自噬会加重海马区神经细胞的受损程度。3.补肾活血方具有降低VD肾虚血瘀证大鼠海马区Beclin-1和LC3蛋白及mRNA的表达、提高P62表达的功效,可以通过抑制自噬,减轻对神经细胞的损伤,改善学习记忆能力。
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