他莫昔芬(TAM)对乳腺癌T47D细胞雌激素受体(ER)表达与18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)摄取的影响

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第一部分乳腺癌T47D细胞ER的表达及TAM治疗后的表达改变目的研究测定乳腺癌T47D细胞ERα和ERβ的表达及经TAM作用后的改变情况。方法在凹形细胞培养皿内接种的细胞数量为1×104个/皿,培养24小时后,利用免疫荧光的方法测定ERα和ERβ的表达情况。采用细胞增殖和细胞毒性检测试剂(CCK-8)法,在96孔板内接种的细胞数量为1×104/孔,分别测定加入不同浓度的TAM(0~1.0×10-5mol/L)200μl,培养24h后的细胞生长抑制率,并计算TAM的半数致死剂量(IC50),用所得IC50处理细胞24h后,利用免疫荧光的方法测定ERα和ERβ的改变情况,并利用蛋白印迹(Western Blot)的方法验证免疫荧光法的结果。结果经免疫荧光法测定乳腺癌T47D细胞表达ERα和ERβ。在浓度为0、1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6、1.0×10-5mol/L的TAM作用下,T47D细胞的生长抑制率分别为(9.88±3.41)%、(23.61±3.30)%、(32.76±5.99)%、(48.85±1.90)%和(64.86±2.54)%。IC50约为1.0×10-6mol/L。免疫荧光法测得TAM作用T47D细胞后ERα下调(对照组144.73±25.19,TAM组92.11±15.48);ERβ无明显改变(对照组248.44±6.92,TAM组247.95±7.66)。Western Blot的结果与免疫荧光结果相一致。结论乳腺癌T47D细胞株同时表达ERα和ERβ两种受体,TAM主要作用于ERα,使其表达下降,ERβ的表达无明显改变。第二部分TAM对乳腺癌T47D细胞18F-FDG摄取的影响目的研究测定乳腺癌T47D细胞经TAM作用后对细胞摄取18F-FDG的影响及与ER表达的关系。方法采用细胞增殖和细胞毒性检测试剂(CCK-8)法,在96孔板内接种的细胞数量为1×104/孔,分别测定加入不同浓度的TAM(0~1.0×10-5mol/L)200μl,培养24h后的细胞生长抑制率。在六孔板内接种的细胞数量为1×106/孔,分别测定加入不同浓度的TAM(0~1.0×10-5mol/L)2ml、培养24h后的测定18F-FDG的细胞摄取率,并计算18F-FDG的细胞摄取抑制率。在凹形细胞培养皿内接种的细胞数量为1×104个/皿,培养24小时后,分别加入不含任何药物的培养基、含TAM浓度为1×10-6mol/L的培养基及与TAM量相等体积的无水乙醇的培养基继续培养24h后,利用免疫荧光的方法测定ERα和ERβ的表达情况。结果TAM浓度分别为0、1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6和1.0×10-5mol/L的情况下作用24h后,细胞生长抑制率分别为(9.88±3.41)%、(23.61±3.30)%、(32.76±5.99)%、(48.85±1.90)%和(64.86±2.54)%。细胞18F-FDG摄取抑制率分别为(4.40±1.94)%、(6.73±3.88)%、(13.00±4.93)%、(44.11±5.33)%和(61.97±8.76)%。免疫荧光法测得TAM作用T47D细胞后ERα下调(对照组178.83±15.11,TAM组111.27±18.19);ERβ无明显改变(对照组230.25±13.37,TAM组233.80±12.30)。结论TAM作用24h后引起乳腺癌T47D细胞的18F-FDG细胞摄取率下降,且TAM作用后ERα的表达下降与18F-FDG的摄取下降呈正相关性。第三部分乳腺癌T47D细胞18F-FDG摄取实验方法探讨目的以乳腺癌T47D细胞及其与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)作用后18F-FDG的摄取改变为例,探讨实验方法改进方面的意见。方法在不同条件下测定乳腺癌T47D细胞的18F-FDG细胞摄取率,细胞数量为1×104~5×106/孔,18F-FDG放射性活度为1.85~29.6kBq,反应时间为20~120min,葡萄糖浓度为0~11mol/L,无糖培养基培养的时间为0~12h。采用细胞增殖和细胞毒性检测试剂(CCK-8)法分别测定加入不同剂量(0~8.0×10-6mol/L)5-FU200μl,培养24h后测定细胞生长抑制率。测定加入不同剂量(0~8.0×10-6mol/L)5-FU2ml,培养24h后18F-FDG的细胞摄取率。结果当每孔1×106个细胞、加入3.7kBq18F-FDG、葡萄糖浓度为0mol/L、作用时间为100min、无糖培养基培养时间为6h时,细胞摄取率可达到(28.07±0.45)%。加入1.0×10-6、2.0×10-6、4.0×10-6和8.0×10-6mol/L5-FU24h后,细胞生长抑制率分别为(26.96±1.33)%、(42.94±2.25)%、(52.65±2.10)%和(60.03±4.35)%。细胞摄取抑制率分别为(17.86±2.96)%、(28.44±7.10)%、(42.62±3.62)%和(69.02±4.03)%。结论5-FU可以影响乳腺癌T47D细胞对18F-FDG的摄取下降。相同浓度下,TAM引起的下降更明显。无糖培养基的培养时间不影响乳腺癌T47D细胞对18F-FDG的摄取。
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